PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
產(chǎn)品僅供科研使用3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱：鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年

注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)熒光素酶(細(xì)菌)，英文名或英文縮寫：Luciferase from Bacteria，級(jí)別：精制級(jí)，40u/mg，規(guī)格：5克

T/G細(xì)胞，人平滑肌細(xì)胞 KM小鼠網(wǎng)織細(xì)胞瘤株,LⅡ細(xì)胞 人真皮成纖維細(xì)胞-胎兒裂解物HDF-f L三鈉鹽三(3-磺酰苯... TPPTS,≥95.0% 63995-70-0 250MG 通用試劑

NEC(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2拂橡膠 III Fluoro gum III

Caki-1(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0046C4-2(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠單核巨噬細(xì)胞;J774A.1ALKPHOS2COMPONENTSYSTEMS堿性嶙酸酶(含酶及稀釋液)生物技術(shù)級(jí)1000 UnitsCOLD

綿羊皮膚細(xì)胞;OAR-S1硅烷偶聯(lián)劑SILANE COUPLING AGENT
A-431(人表皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2十二烷基本磺酸鈉-6，英文名或英文縮寫：wo7ium dodecylbenzenesulfonate，級(jí)別：FMP，規(guī)格：1克

RK2 Others Human 人 RK2 / k-B / KB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 1-脫氧-D-葡萄糖-5-鱗醋酯內(nèi)鹽 ≥99.0% (TLC)(-20°C) (2,3-dixy7noxy-4-oxo-pqntoxy)phosphonic ccid 190079-18-6

恒河猴胚腎細(xì)胞;FRhK-4 [FRhK4]紅色氧化;四氧化三;丹;紅丹;氧化 Lqcd(II,IV)oxidq;MiniuM 1314-41-6

AFM Others Human 人 AFM / Afamin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) AEBSFAEBSF蛋白組學(xué)級(jí)50MG30827-99-7COLD

小腸平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)6284-40-8葡MegluMine (AS)
RTN4R Others Human 人 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 乙酰輔酶A三鋰鹽Acetyl coenzyme A trilithium salt質(zhì)量規(guī)格：95%,美國進(jìn)口原裝

人胰腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL尿素酶,脲酶(巨豆)Urease質(zhì)量規(guī)格：>45 U/mg,進(jìn)分

HT1080細(xì)胞，人成纖維細(xì)胞 熱帶念珠菌 tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-1A3蛋白酶VIIIProtease type VIII質(zhì)量規(guī)格：美國原裝進(jìn)口7-15 units/mg,來源于地衣芽孢桿菌

CCL3 Protein Rat 重組大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白曲安奈德Triamcinolone Acetonide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

MDBK(牛腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphB2 / Hek5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 曲安奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)Triamcinolone Acetonide質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型探針法熒光定量PCR試劑盒PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 草酸依地普侖/草酸艾司西酞普蘭（標(biāo)準(zhǔn)品）Escitalopram Oxalate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性細(xì)胞;RBL-1消旋卡多曲Racecadotril質(zhì)量規(guī)格：>99.5%，EP6.2

BEL-7402細(xì)胞，細(xì)胞 人口腔表皮樣癌細(xì)胞,KB細(xì)胞 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A2消旋卡多曲（標(biāo)準(zhǔn)品）Racecadotril質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

C57BL/6小鼠T細(xì)胞瘤細(xì)胞;RMA乙酰螺旋霉素Acetylspiramycin質(zhì)量規(guī)格：>1200u/mg,CP2005

CD226 Others Human 人 CD226 / DNAM-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 尼羅替尼Nilotinib質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

操作流程：
產(chǎn)品僅供科研使用1. 整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。