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    上海帛科生物技術(shù)有限公司
       
       
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    禽正呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
    • 品牌:帛科
    • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
    • 貨號:BK-P64636
    • 價格: ¥3800/盒
    • 發(fā)布日期: 2020-07-07
    • 更新日期: 2025-11-12
    產(chǎn)品詳請
    產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
    品牌 帛科
    貨號 BK-P64636
    用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
    包裝規(guī)格 50次
    純度 %
    CAS編號
    是否進(jìn)口


    絲狀鏈霉菌   枝芽胞桿菌 Virgibacillus sp.
    脫硫弧菌脫硫亞種(脫硫微螺菌、脫硫螺菌、脫硫桿菌、脫硫芽孢弧菌、脫硫弧菌)   枝芽胞菌 Virgibacillus sp.
    擬熱帶假絲酵母   鹽水球菌 Salinococcus sp.
    許旺酵母變種   蘇云金芽胞桿菌勵木亞種 Bacillus thuringiensis subsp. tochigiensis
    胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)90mm   盲腸腸球菌
    海棗曲霉   巴西毛殼
    噬糖鹽紅菌 
    本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

    產(chǎn)品名稱

    規(guī)格

    貨號

    禽正呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    50

    BK-P64636

    實(shí)驗(yàn)方法步驟:
    方法
    1
    :在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer
    5 μl     dNTP mix
    2mM
    4 μl
    引物110pM
    2 μl
    引物210pM
    2 μl     Taq
    酶 (2U/μl
    1 μl     DNA
    模板(50ng-1μg/μl
    1 μl
    ddH2O 50 μl

    PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
    取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
    兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,1530℃孵育23分鐘。4℃12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%
    ③RNA
    沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530℃孵育10分鐘后,于4℃12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
    ④RNA
    清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃7000rpm離心5分鐘。
    ⑤RNA
    干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
    溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
    使用方法:
    一、樣品采集:
    1
    、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
    2
    、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
    3
    、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
    4
    、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
    一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 10 倍稀釋度為例)
    1.
    注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
    2.
    標(biāo)記 6 個離心管,分別為 765432
    3.
    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
    4.
    7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    5.
    換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
    6.
    換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    7.
    重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

    中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO鹽酸雷尼替丁Ranitidine HCl質(zhì)量規(guī)格:>98%

    Tul-1細(xì)胞,細(xì)胞系 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞,WB-F344細(xì)胞 T-101B胰蛋白酶(100mL 酶解緩沖液)10mL鹽酸雷尼替丁(標(biāo)準(zhǔn)品)Ranitidine HCl質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

    SK-MES-1(肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2熒光素鈉Fluorescein di salt質(zhì)量規(guī)格:BS

    HUVEC-c pre-screened 預(yù)選型正常臍內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 500,000cells 大隱平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)D-蟲熒光素鈉鹽;D-熒光素鈉鹽D-Luciferin  salt質(zhì)量規(guī)格:>98%

    原代骨骼肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml2ˊ,7ˊ-二氯熒光素鈉鹽2',7'-Dichlorofluorescein  Salt 質(zhì)量規(guī)格:>98%
    骨骼肌細(xì)胞生長添加物SkMCGS奧美拉唑-d3Omeprazole-d3質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    VEGFA Others Human  VEGF121b / VEGF-A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 奧美拉唑酸二鈉鹽Omeprazole Acid Di Salt質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    癌細(xì)胞;MDA-MB-435S2-代腺苷2-Iodo Adenosine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    CNE-2Z細(xì)胞,母系細(xì)胞 小鼠*瘤細(xì)胞,SP2/0細(xì)胞 恒河猴腎細(xì)胞;RM-1N6-丙酰蟲草素N6-Propionyl Cordycepin 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    MSTO-211H(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2N6-月桂酰蟲草素N6-Lauroyl Cordycepin 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
    上皮細(xì)胞培養(yǎng)基-2EpiCM-2-prf強(qiáng)力霉素鹽酸鹽Doxycycline 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    CDH2 Others Human  N-Cadherin / CD325 / CDH2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 強(qiáng)力霉素磺基水楊酸Doxycycline ssa質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293 Ad5強(qiáng)力霉素海克酸鹽Doxycycline Hyclate質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    HNE3細(xì)胞,細(xì)胞 小鼠瘤細(xì)胞,EL4細(xì)胞 CM-H022成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL帕米1酸二鈉鹽Pamidronate, Di Salt質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

    NCI-N87(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2頭孢呋辛Cefuroxime質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
    ES-2 卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞秦皮甲素(標(biāo)準(zhǔn)品)Esculin質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

    CW-2腺癌細(xì)胞 CW-2 human colon adenocarcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS氨基三乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Nitrilotriacetic acid質(zhì)量規(guī)格:供HPLC法雜質(zhì)檢查用

    TNFSF13 Protein Mouse 重組小鼠 TNFSF13 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)13-(標(biāo)準(zhǔn)品)1,3- Propylene Glycol質(zhì)量規(guī)格:供檢查用

    脂肪細(xì)胞-皮下(HPA-s)(1×106 ) RajiButt's瘤細(xì)胞 Human二甘醇(標(biāo)準(zhǔn)品)Diethylene Glycol質(zhì)量規(guī)格:供檢查用

    ;Calu-3氯噻嗪(標(biāo)準(zhǔn)品)Chlorothiazide質(zhì)量規(guī)格:供HPLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用

    實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
    1
    RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
    2
    )客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
    3
    )客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
    4
    )樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
    實(shí)時熒光定量PCRquantitative real-time PCRqPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNARNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
    禽正呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒主要服務(wù):DNARNA*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
    主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR


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