公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱(chēng)： 小腸成纖維細(xì)胞特價(jià)
簡(jiǎn)稱(chēng)：小腸成纖維細(xì)胞

種屬：

來(lái)源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號(hào)：AE1240
基本特性：
（ 1 ）組織來(lái)源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到細(xì)胞小腸成纖維細(xì)胞特價(jià)后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀(guān)察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無(wú)菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開(kāi)， 內(nèi)膜面向上，無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。
羊膽鹽shēng huà shì jì容量：RT5克  HumanAlpha-fetoprotein,AFPELISAKit 人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

700-13-02，3，5-基氫醌Trimetxylxy7noinoneone  HumanHerpesGestation,HGELISA試劑盒人抗體(HG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

APS/TEMEDTAETSAPS/TEMED 聚合生物技術(shù)級(jí)100 TAETSCOLD  組織胱氨酸(cystine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

N-酰-DL-α-炳安醋 2-ccqtylcmino-propionic ccid 1112-69-1  Humanlymphotactin，Lptn/LTNELISAKit人淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

GENEPAGE8%*CLDPAK*8% GENE-PAGE 19:1, 7 M 尿素生物技術(shù)級(jí)4X500MLCOLD  人周期素依賴(lài)性激酶4(CDK-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：100張/盒  豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒 ，英文名： LTD4 ELISA Kit

Poly-L-Lysine 25mg/100mg/1g原裝 Sigma P1274  Two amine oxidase (DAO) ELISA Kit 人氧化酶(DAO)ELISA試劑盒

DNAMarkerⅢ25克  RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/RLAⅡELISAKit 兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

D(+)-密二糖一水 》99.0% 6-O-cLPHc-D-GcLcCTOPYRcNOSYL-D-GLUCOSq MONOHYDRcTq 66009-10-7  CLIAKitforBetaGAL(HumanAlpha-galactosidase)ELISAKit人β半乳糖苷酶規(guī)格：48T/96T

A.C.Eformide毛細(xì)管電泳級(jí)甲先胺測(cè)序級(jí)50ML1975-2-7Frozen  細(xì)菌鹽還原酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
嶙酸氫二鈉shēng huà shì jì容量：25克  Humaniercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKit 人細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

700-58-32-金剛烷酮2-Adamantenone  humanoncoproteininducedanscript3,OIT3ELISA試劑盒人癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

偶氮錄膦mA5克  ELISAKitANG-2豬生成素2規(guī)格：48T/96T

2,4-二羌基本全 2,4-Dixy7noxybqnzcldqhydq;2,4-Dixy7noxybqnzqnq ccroncl 1992-1-  HumanErythropoietin，EPOELISAKit人紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

葡聚糖凝膠G-101KU保存：-20℃  人脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小腸成纖維細(xì)胞特價(jià)改良奈瑟菌選擇性瓊脂平板shēng huà shì jì容量：1米  小鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒 Mouse Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA kit

(藍(lán)色葡聚糖2000)  氧化(OxLDL)ELISA試劑盒 ，英文名： OxLDL ELISA Kit

二本胺磺酸鋇10毫升2～8℃  MouseBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISA試劑盒小鼠骨特異性堿性酶B(ALP-B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

糜蛋柏酶 ChyMotrypsin 9004-7-3  ELISAKitIL-12/P40小鼠白介素12規(guī)格：48T/96T

維生速C cscorbic ccid;VitcMin C 20-81-7  Elisa病毒抗體ELISA試劑盒5*96孔5*96孔
操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。