PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Valsartan methyl ester  137863-17-3  中文名：  分子式：C25H31N5O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠凝血因子X   英文名稱：   blood coagulation factor X   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FX

Valsartan  137862-53-4  中文名：纈沙坦  分子式：C24H29N5O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠凝血因子XIII B   英文名稱：   Mouse Coagulation Factor XIII B Polypeptide   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   F13B

Valnemulin hydrochloride  133868-46-9  中文名：鹽酸沃尼妙林  分子式：C31H53ClN2O5S  度：98.0%      小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISAKit  

Valdecoxib  181695-72-7  中文名：帕瑞考昔  分子式：C16H14N2O3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠網(wǎng)膜素(omein)ELISAKit  

Uzarigenin digitaloside  61217-80-9  中文名：  分子式：C30H46O8  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  夾竹桃; 強(qiáng)心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  兔子組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISAKit
Ethyl 3-cyclopropyl-3-oxopropanoate  24922-02-9  中文名：  分子式：C8H12O3    HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21AELISA試劑盒人細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Mecobalamin  13422-55-4  中文名：甲鈷胺  分子式：C63H91CoN13O14P    組織HHV6-A(HUMANHERPESVIRUS6-A)病毒定性檢測(cè)試劑盒20次

Terbinafine hydrochloride  78628-80-5  中文名：鹽酸特比萘芬  分子式：C21H26ClN    HumanPlatelet-DerivedGrowthFactor-BB，PDGF-BBELISAKit人血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Domperidone  57808-66-9  中文名：多潘立酮  分子式：C22H24ClN5O2    兔子組織多肽抗原(TPA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

3-(1-Piperazinyl)-1,2-benzisothiazole  87691-87-0  中文名：  分子式：C11H13N3S    Rat vascular endothelial cell growth factor D (VEGF-D) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒
禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)硝酸奧昔康唑（標(biāo)準(zhǔn)品）  Oxiconazole Nitrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 大鼠氧化抗體(OLAb)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit 96T/48T

普瑞巴林（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pregabalin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)試劑盒 Human IL-2sRα ELISA Kit

(S)-(+)-苯乙醇酸（普瑞巴林雜質(zhì)）（標(biāo)準(zhǔn)品）  [(S)-(+)-MandelicAcid] （Pregabalin impurity）  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 英文名稱MouseTissuefactorpathwayinhibitorELISAKit小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)規(guī)格：96T/48T

山梨醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  D-Sorbitol  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 PARP蛋白共沉淀分析試劑盒5

乙二醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ethylene Glycol  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 Porcineplateletactivatingfactor,PAFELISA試劑盒豬血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

降二氫辣椒堿  Nordihydrocapsaicin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甘油-3-0酸脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒 ，英文名： GAPDH ELISA Kit

4-甲氨基安替比林（標(biāo)準(zhǔn)品）  4-(Methylamino)-antipyrine  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanLungresistance-relatedprotein,LRPELISAKit 96T/48T

硫酸肼（標(biāo)準(zhǔn)品）  Hydrazine sulfate  質(zhì)量規(guī)格：供TLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用 大鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)試劑盒 Rat Epithelial neuophil activating peptide 78,ENA-78 ELISA Kit

硫酸肼（標(biāo)準(zhǔn)品）  Hydrazine sulfate  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 英文名稱RatFIXELISAKit大鼠凝血因子IX規(guī)格：96T/48T

環(huán)扁桃酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Cyclandelate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 活體細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)原位染色試劑盒(超氧陰離子)100
N-硝基-L-精氨酸甲酯  N'-Nitro-L-arginine-methyl ester hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>98% 人不對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)試劑盒 Human asymmeical dimethylarginine,ADMA ELISA Kit

N-苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(BTEE)  N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester  質(zhì)量規(guī)格：>98% 人不透光相關(guān)蛋白(OPAs)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanOpacity-associatedproteins,OPAsELISAKit 96T/48T

AEBSF絲氨酸抑制劑  AEBSF HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人布盧姆綜合征蛋白(BLM)試劑盒 Human BLM ELISA Kit

AEBSF(進(jìn)分)  AEBSF HCl  質(zhì)量規(guī)格：>97%,進(jìn)分TCI A2215 人布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)試劑盒 Human Brucella Aibody IgG,Brucella Ab IgG ELISA Kit

鹽酸貝他定(進(jìn)口)  Bestatin HCl  質(zhì)量規(guī)格：≥98%,美國(guó)進(jìn)口 人層連蛋白/板層素(LN)試劑盒 Human Laminin,LN ELISA KIT

鄰菲啰啉鹽酸鹽，一水  1,10-Phenanthroline hydrochloride monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99% 人層粘連蛋白-5(LN-5)試劑盒 Human Laminin-5,LN-5 ELISA Kit

膦酰二肽鈉  Phosphoramidon di salt  質(zhì)量規(guī)格：0.99 人層粘連蛋白β1(LN-β1)試劑盒 Human Laminin β1,LN-β1 ELISA Kit

癸基喃葡萄糖;癸基吡喃葡萄糖苷  Decyl β-D-glucopyranoside   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人層粘連蛋白亞基γ-2(LAMC2)試劑盒 Human LAMC2 ELISA Kit

德羅特韋(GSK-1349572,DTG)  Dolutegravir,GSK1349572  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人腸道病毒71型(EV71)抗體(IgM)試劑盒 Human eerovirus 71 virus(EV71)aibody(gM)ELISA kit

十二烷基吡喃葡萄糖苷；月桂酰基喃葡萄糖  Dodecyl glucopyranoside  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人腸三葉因子(ITF)試劑盒 Human Iestinal efoil factor,ITF ELISA Kit
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。