PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：副雞禽桿菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷(xiāo)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Withaperuvin C  81644-34-0  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  關(guān)鍵詞：  酸漿屬; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒  

Withanolide S  63139-16-2  中文名：醉茄內(nèi)酯S  分子式：C28H40O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  南非醉茄; 睡茄交酯; 睡茄內(nèi)酯; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒  

Withanolide C  108030-78-0  中文名：醉茄內(nèi)酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  細(xì)胞毒活性; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒  

Wallicoside  88797-59-5  中文名：斷節(jié)參苷  分子式：C61H98O26  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒           

Vildagliptin  274901-16-5  中文名：維達(dá)列汀  分子式：C17H25N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit
5-Aminosalicylic acid  89-57-6  中文名：5-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3    CLIAKitforATA(HumanAngiotensinaseA)ELISAKit人緊張肽酶A規(guī)格：48T/96T

Norfloxacin  70458-96-7  中文名：諾氟沙星  分子式：C16H18FN3O3    線粒體復(fù)合物V蛋白共沉淀分析試劑盒5次

Indapamide  26807-65-8  中文名：吲達(dá)帕胺  分子式：C16H16ClN3O3S    Rabbitadramycin,ADRELISAKit兔阿霉素(ADR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Loperamide hydrochloride  34552-83-5  中文名：鹽酸洛哌丁胺  分子式：C29H34Cl2N2O2    豚鼠Ⅱ型肺泡細(xì)胞表面抗原(KL-6)ELISA試劑盒 ，英文名： KL-6 ELISA Kit

Nefopam hydrochloride  23327-57-3  中文名：鹽酸奈福泮  分子式：C17H20ClNO    Human pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒
副雞禽桿菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷(xiāo)蒙脫石（標(biāo)準(zhǔn)品）  Montmorillonit  質(zhì)量規(guī)格：鑒別 人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA檢測(cè)試劑盒Humancholecystokininoctapeptide,CCK-8ELISAKit 96T/48T

佛手柑素;香檸檬素;佛手柑亭;香檸檬亭（標(biāo)準(zhǔn)品）  Bergamottin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)試劑盒 Rat Nerve growth factor,NGF ELISA kit

鹽酸羅哌卡因（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ropivacaine hydrochloride   質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 英文名稱(chēng)RatCoisolELISAKit大鼠皮質(zhì)醇(Coisol)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

番石榴苷（標(biāo)準(zhǔn)品）  Guaijaverin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 活體細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒20

恩曲他濱（標(biāo)準(zhǔn)品）  Emtricitabine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 ELISAKitPlg人纖溶酶原規(guī)格：48T/96T

恩曲他濱  Emtricitabine  質(zhì)量規(guī)格：>99%,核苷逆轉(zhuǎn)錄酶(NRTI)抑制劑 小鼠肝素蛋白聚糖2(HSPG2)ELISA試劑盒 ，英文名： HSPG2 ELISA Kit

肌酐（標(biāo)準(zhǔn)品）  Creatinine  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 人神經(jīng)降壓素()ELISA檢測(cè)試劑盒HumanNeurotensin,ELISAKit 96T/48T

雙氯芬酸鉀（標(biāo)準(zhǔn)品）  Diclofenac Potassium  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 大鼠血紅蛋白(HbCO)試劑盒 Rat Carboxyhemoglobin,HbCO ELISA Kit

依西美坦（標(biāo)準(zhǔn)品）  Exemestane  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 英文名稱(chēng)MMP-1金屬基質(zhì)蛋白酶-1規(guī)格：96T/48T

鹽酸曲美他嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）  Trimetazidine Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20
N-乙?；前芳讗哼?/span>  N-Acetyl Sulfamethoxazole  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatAngiogeninELISAKit大鼠生長(zhǎng)素(Angiogenin)規(guī)格：96T/48T

磺胺甲惡唑 β-D-葡萄糖苷酸  Sulfamethoxazole β-D-Glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatAngiopoietin-2ELISAKit大鼠生成素-2(ANG-2)規(guī)格：96T/48T

頭孢匹羅  Cefpirome  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatAngiopoietin-2ELISAKit大鼠生成素-2(ANG-2)規(guī)格：96T/48T

阿米舒必利-d5  Amisulpride-d5  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatangiotensinogenELISAKit大鼠緊張素原(aGT)規(guī)格：96T/48T

美羅培南碳酸鈉  Meropenem with  carbonate  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatangiotensinogenELISAKit大鼠緊張素原(aGT)規(guī)格：96T/48T

美羅培南鈉鹽  Meropenem  Salt  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatangiotensionIELISAKit大鼠緊張素I(AngI)規(guī)格：96T/48T

6,8-二甲氧基莫西沙星鹽酸鹽  6,8-Dimethoxy Moxifloxacin Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatangiotensionIELISAKit大鼠緊張素I(AngI)規(guī)格：96T/48T

8-乙氧基莫西沙星  8-Ethoxy Moxifloxacin  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatansferrieceptorELISAKit大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)規(guī)格：96T/48T

8-去甲氧基-8-氟莫西沙星  8-Desmethoxy-8-fluoro Moxifloxacin  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatansferrieceptorELISAKit大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)規(guī)格：96T/48T

外消旋順式-莫西沙星?；?/span>-β-D-葡萄糖苷酸  rac cis-Moxifloxacin Acyl-β-D-glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱(chēng)RatAquaporin0ELISAKit大鼠水通道蛋白0(AQP0)規(guī)格：96T/48T
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。