PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：巴貝斯屬蟲通用PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

α-Spinasterol  481-18-5  中文名：α-菠甾醇  分子式：C29H48O  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  ; 栝樓; 豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗線粒體抗體(mouse AMA)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

α-Lipoic acid  1077-28-7  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗核抗體(mouse ANA)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

α-Lapachone  4707-33-9  中文名：  分子式：C15H14O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  萘醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠緊張素II(mouse ANG II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

α-D-Glucose  492-62-6  中文名：α-D-葡萄糖  分子式：C6H12O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠脂肪酸合成酶   英文名稱：   Mouse Fatty Acid Syhase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FAS

    中文名：佐匹克隆  分子式：C17H17ClN6O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠促卵泡生成激素   英文名稱：   Mouse Follicle Stimulating Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FSH
2-Methyl-4-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid  317374-08-6  中文名：  分子式：C16H15NO3    CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/MELISAKit大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M規(guī)格：48T/96T

7-Chloro-1,2,3,4-tetrahydrobenzo[b]azepin-5-one  160129-45-3  中文名：  分子式：C10H10ClNO    細菌營養(yǎng)瓊脂平板50個

Nicorandil  65141-46-0  中文名：尼可地爾  分子式：C8H9N3O4    RabbitEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit兔子表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Dronedarone hydrochloride  141625-93-6  中文名：鹽酸決奈達隆  分子式：C31H45ClN2O5S    豚鼠白介素10(IL10)ELISA試劑盒 ，英文名： IL10 ELISA Kit

Bisoprolol fumarate  104344-23-2  中文名：富馬酸比索洛爾  分子式：C22H35NO8    Human mannose receptor (MR) ELISA Kit 人甘露糖受體(MR)ELISA試劑盒
巴貝斯屬蟲通用PCR檢測試劑盒直銷5-氨基水楊酸,美沙拉秦  5-Aminosalicylic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人β2糖蛋白(β2-GP)ELISA檢測試劑盒Humanbeta2glycoprotein,β2-GPELISAKit 96T/48T

鹽酸喹那普利（標準品）  Quinapril hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 大鼠蛋白(nephrin)試劑盒 Rat Nephrin ELISA Kit

愛普列特（標準品）  Epristeride  質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測定 英文名稱RatPSAELISAKit大鼠特異性抗原(PSA)規(guī)格：96T/48T

羥苯磺酸鈣（標準品）  Calcium dobesilate  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 活體細胞半胱氨酸蛋白酶-2(CASPASE-2)活性原位熒光染色檢測試劑盒20

異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷（標準品）  Isorhamnetin 3-glucoside-7-rhamnoside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%,標準品 ELISAKitABCA1人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1規(guī)格：48T/96T

西吡氯銨（標準品）  Cetylpyridinium chloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒 ，英文名： SCF/MGF ELISA Kit

硫酸羥氯喹（標準品）  Hydroxychloroquine sulfate  質(zhì)量規(guī)格：UV法溶出度檢查 大鼠葉酸(FA)ELISA檢測試劑盒RatFolicacid,FAELISAKit 96T/48T

車葉草苷（標準品）  Asperuloside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 人白介素35(IL-35)試劑盒 Human Ierleukin 35,IL-35 ELISA Kit

Galeterone (TOK001)  TOK-001  質(zhì)量規(guī)格：>98%,CYP17抑制劑 Wheatgermagglinin,WGAELISAKit麥胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

山柰酚-3-槐二糖-7-鼠李糖苷  Kaempferol 3-sophoroside-7-rhamnoside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥85%,標準品 PAR-2(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
Prosapogenin CP6  Prosapogenin CP6  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔細胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA檢測試劑盒Rabbitlymphocytefunctionassociatedaigen3,LFA-3ELISAKit 96T/48T

Crovatin  Crovatin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA檢測試劑盒RabbitEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 96T/48T

Croverin  Croverin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA檢測試劑盒Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAkit 96T/48T

levatin  levatin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA檢測試劑盒RabbitUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 96T/48T

蒼耳亭（標準品）   Xanthatin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA檢測試劑盒Rabbitprothrombinfragme1+2,F1+2ELISAKit 96T/48T

辛辣內(nèi)酯A（標準品）  Pungiolide A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔去甲(NA)ELISA檢測試劑盒RabbitNoradrenaline,NAELISAKit 96T/48T

麻楓樹酚酮B（標準品）   Jatropholone B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA檢測試劑盒RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit 96T/48T

3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇（標準品）  3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol   質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA檢測試劑盒RabbitHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit 96T/48T

11-羥基柳杉酚（標準品）  11-hydroxy-sugiol   質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 兔熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA檢測試劑盒RabbitHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit 96T/48T

L-乳酸(標準品)  L-(+)-Lactic acid  質(zhì)量規(guī)格：≥98%,標準品 兔熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA檢測試劑盒RabbitHeatShockProtein90,HSP-90ELISAKit 96T/48T
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。