PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：箭毒蛙壺菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISAKit     Hypocrellin A  中文名：竹紅菌甲素  分子式：C30H26O10 

大鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)ELISAKit     Tokinolide B  中文名：  分子式：C24H28O4 

大鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)ELISAKit     Tokinolide B  112966-16-2  中文名：  分子式：C24H28O4  度：96.0%  關(guān)鍵詞： 

大鼠固(ALD)ELISAKit     Tolazoline hydrochloride  中文名：鹽酸妥拉唑林  分子式：C10H13ClN2 

大鼠二氧化酶elisa試劑盒   大鼠二氧化酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠二氧化酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠二氧化酶試劑盒、大鼠二氧化酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Lonidamine  中文名：氯尼達(dá)明  分子式：C15H10Cl2N2O2
Tegafur  17902-23-7  中文名：替加氟  分子式：C8H9FN2O3    人真核翻譯起始因子3aelisa試劑盒   人真核翻譯起始因子3a試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人真核翻譯起始因子3a試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人真核翻譯起始因子3a試劑盒、人真核翻譯起始因子3a elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Sorafenib tosylate  475207-59-1  中文名：索拉非尼  分子式：C28H24ClF3N4O6S    人長(zhǎng)效甲狀腺刺激素elisa試劑盒   人長(zhǎng)效甲狀腺刺激素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人長(zhǎng)效甲狀腺刺激素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人長(zhǎng)效甲狀腺刺激素試劑盒、人長(zhǎng)效甲狀腺刺激素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Sorafenib  284461-73-0  中文名：索拉非尼  分子式：C21H16ClF3N4O3    人粘膜相關(guān)上皮趨化因子elisa試劑盒   人粘膜相關(guān)上皮趨化因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人粘膜相關(guān)上皮趨化因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人粘膜相關(guān)上皮趨化因子試劑盒、人粘膜相關(guān)上皮趨化因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Loxoprofen  68767-14-6  中文名：洛索洛芬  分子式：C15H18O3    人早老素2elisa試劑盒   人早老素2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人早老素2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人早老素2試劑盒、人早老素2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Retigabine  150812-12-7  中文名：瑞替加濱  分子式：C16H18FN3O2    人著絲粒蛋白Belisa試劑盒   人著絲粒蛋白B試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人著絲粒蛋白B試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人著絲粒蛋白B試劑盒、人著絲粒蛋白B elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
箭毒蛙壺菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格土大黃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  Rhapontin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 ELISAKitcTn-Ⅰ人心肌肌鈣蛋白Ⅰ規(guī)格：48T/96T

鹽酸苯海索（標(biāo)準(zhǔn)品）  Benzhexol hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠谷酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA試劑盒 ，英文名： GAD-Ab-IgM ELISA Kit

葉酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Folic acid  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 大鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratai-endothelialcellaibody,AECAELISAKit 96T/48T

葡萄糖酸鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)  Calcium gluconate  質(zhì)量規(guī)格：檢查 人白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)試劑盒 Human ALCAM ELISA Kit

雙羥萘酸噻嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pyrantel pamoate  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 Ricinuscommunisagglinin,RCAELISAKit蓖麻凝集素(RCA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

雙羥萘酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pamoic acid  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 P21基因表達(dá)北方雜交分析試劑盒5

酚酞（標(biāo)準(zhǔn)品）  Phenolphthalein  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 Porcineierleukin8,IL-8ELISA試劑盒豬白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

香草醛（熔點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品）   Vanillin  質(zhì)量規(guī)格：熔點(diǎn)測(cè)定 小鼠谷酸脫羧酶自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA試劑盒 ，英文名： GAD-Ab-IgG ELISA Kit

環(huán)吡酮;環(huán)匹羅司  Ciclopirox  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA檢測(cè)試劑盒RatannexinⅤ,ANX-ⅤELISAKit 96T/48T

環(huán)吡酮;環(huán)匹羅司(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ciclopirox  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 人白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(LR)試劑盒 Human leukoregulin,LR ELISA Kit
ε-聚賴氨酸  Epsilon Polylysine   質(zhì)量規(guī)格：溶解性數(shù)據(jù)為19.8,分子量小于5000 大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)試劑盒 Rat Gelsolin ELISA Kit

普羅雌烯  Promestriene  質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BR 大鼠凝血酶抗凝血酶Ⅲ復(fù)合物(TAT-III)試劑盒 Rat thrombin-aithrombin III complex,TAT-III ELISA Kit

波生坦(水合物)  Bosentan hydrate  質(zhì)量規(guī)格：≥98.5%（HPLC）,BR,一水合物 大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratthrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit 96T/48T

波生坦水合(標(biāo)準(zhǔn)品)  Bosentan hydrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)試劑盒 Rat thrombin-aithrombin complex,TAT ELISA Kit

福沙吡坦二甲葡胺(MK-0517)   Fosaprepitant dimeglumine  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%;P/神經(jīng)激肽受體拮抗劑 大鼠凝血酶受體()ELISA檢測(cè)試劑盒Ratthrombieceptor,ELISAKit 96T/48T

普拉格雷  Prasugrel  質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BR 大鼠凝血酶受體()試劑盒 Rat thrombin receptor, ELISA Kit

鹽酸可樂定  Clonidine hydrochloride   質(zhì)量規(guī)格：>98.0%,BR 大鼠凝血酶原片段F1+2(F1+2)試劑盒 Rat prothrombin fragme 1+2,F1+2 ELISA Kit

鹽酸可樂定(標(biāo)準(zhǔn)品)  Clonidine hydrochloride   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA檢測(cè)試劑盒RatcoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit 96T/48T

2-甲氧基雌二醇(進(jìn)分)  2-Methoxyestradiol  質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分，SigmaM6383 大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)試劑盒 Rat coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA Kit

2-甲氧基雌二醇  2-Methoxyestradiol  質(zhì)量規(guī)格：≥98.0%,國(guó)產(chǎn) 大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA檢測(cè)試劑盒RatcoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISAKit 96T/48T
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。