PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：藍(lán)舌病病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

肝生素/肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子   英文名稱：   hepatocyte growth factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HGF  Przewaquinone A  76843-23-7  中文名：紫丹參甲素  分子式：C19H18O4 

肝/肌糖元檢測(cè)   Lipofuscin (including colorimeic detection)  Racecadotril  81110-73-8  中文名：消旋卡多曲  分子式：C21H23NO4S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

肝/肌糖元測(cè)試盒   Liver / muscle glycogen test kit  4,6-Dichloro-2-(propylthio)pyrimidin-5-amine  145783-15-9  中文名：  分子式：C7H9Cl2N3S 

甘油三酯（TG酶法）測(cè)試盒   Serum high-density lipoprotein (HDL) test kit  Oxytetracycline hydrochloride  2058-46-0  中文名：鹽酸土霉素  分子式：C22H25ClN2O9  度：98.0%   

甘油三酯（TG）含量測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣  Atorvastatin calcium  中文名：阿托伐他汀鈣  分子式：C33H35FN2O5  度：98.0%
2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid  91702-98-6  中文名：  分子式：C12H14O3S    人趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISAKit  

Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  113898-97-8  中文名：  分子式：C13H15NO2    人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(bFGF-9)ELISAKit  

2-Deoxy-2,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-1-ulose-3,5-dibenzoate  122111-01-7  中文名：  分子式：C19H14F2O6    人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)ELISAKit              

D-Mannitol diacetonide  1707-77-3  中文名：  分子式：C12H22O6    人中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白elisa試劑盒   人中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白試劑盒、人中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Pemetrexed  137281-23-3  中文名：培美曲塞二鈉  分子式：C20H21N5O6    人中性粒細(xì)胞堿性0酸酶elisa試劑盒   人中性粒細(xì)胞堿性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人中性粒細(xì)胞堿性0酸酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人中性粒細(xì)胞堿性0酸酶試劑盒、人中性粒細(xì)胞堿性0酸酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
藍(lán)舌病病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)異鼠李素(標(biāo)準(zhǔn)品）  Isorhamnetin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 ELISAKitTSLP人胸腺基質(zhì)細(xì)胞生成素規(guī)格：48T/96T

異鼠李素-3-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  Isorhamnetin-3-O-β-D-Glucoside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)ELISA試劑盒 ，英文名： TNNI2 ELISA Kit

異鼠李素-3-O-新橙皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 人前體蛋白(TpP)ELISA檢測(cè)試劑盒Humahrombusprecursorprotein,TpPELISAKit 96T/48T

異土木香內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Isoalantolactone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠酸性0酸酶(ACP)試劑盒 Rat Acid Phosphatase,ACP ELISA Kit

異烏藥內(nèi)酯/異烏藥醚內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Isolinderalactone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatglialfibrillaryacidicproteinELISAKit大鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

VRT752271  VRT-752271.HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98%,鹽酸鹽形式,蛋白激酶抑制劑 環(huán)境傷寒沙門氏菌B(SalmonellaParatyphiB)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

奧巴克拉甲磺酸鹽  Obatoclax Mesylate;GX15-070  質(zhì)量規(guī)格：≥98%,Bcl-2拮抗劑 ELISAKitTARC/CCL17人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子規(guī)格：48T/96T

淫羊藿素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Icaritin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒 ，英文名： OT/BGP ELISA Kit

銀杏內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ginkgolide A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit 96T/48T

銀杏內(nèi)酯B(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ginkgolide B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 人包蟲抗體IgG 試劑盒 Human echinococcus aibody IgG ELISA Kit
阿替洛爾-d7  Atenolol-d7  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanFree-T4ELISAKit人游離甲狀腺素(Free-T4)規(guī)格：96T/48T

阿托伐他汀  Atorvastatin  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanFXELISAKit人凝血因子X(FX)規(guī)格：96T/48T

4-羥基阿托伐他汀內(nèi)酯  4-Hydroxy Atorvastatin Lactone  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱humanf-β-HCGELISAKIT人游離β絨毛膜激素(f-β-HCG)規(guī)格：96T/48T

2-羥基阿托伐他汀內(nèi)酯  2-Hydroxy Atorvastatin Lactone   質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱humanGADELISAKIT人谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD)規(guī)格：96T/48T

2-羥基阿托伐他汀內(nèi)酯-d5  2-Hydroxy Atorvastatin Lactone-d5  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanGamma-aminobyricacidELISAKit人γ氨基(GABA)規(guī)格：96T/48T

2-羥基阿托伐他汀單鈉鹽二水合物  2-Hydroxy Atorvastatin Dihydrate Mono Salt   質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanGATA4ELISAKit人心肌轉(zhuǎn)錄因子(GATA4)規(guī)格：96T/48T

阿托伐他汀內(nèi)酯  Atorvastatin Lactone  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanG-CSFELISAKit人粒細(xì)胞克隆刺激因子(G-CSF)規(guī)格：96T/48T

阿托伐他汀 酰基-β-D-葡萄糖醛酸苷 70%, 含 30% 內(nèi)酯  Atorvastatin Acyl-β-D-glucuronide 70%, contains up to 30% lactone  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanGehrelinElisakit人腦腸肽(Gehrelin)規(guī)格：96T/48T

脫氟阿托伐他汀鈉  Defluoro Atorvastatin  Salt   質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanGelsolinELISAKit人凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

阿托伐他汀內(nèi)酯-d5  Atorvastatin-d5 Lactone  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanghrelinELISAKit人生長(zhǎng)激素釋放多肽(ghrelin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。