PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：牛病毒PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

內(nèi)皮生長因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19 

內(nèi)皮生長因子 (VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Androstanolone 17-benzoate  中文名：雄諾龍苯甲酸酯  分子式：C26H34O3  度：98.0%

緊張素轉(zhuǎn)化酶   英文名稱：   Angiotensin Conveing Enzyme   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACE  Otophylloside B  中文名：青陽參苷B  分子式：C49H78O16  度：97.0%

緊張素I(素、AngI)   96T/48T  Ornidazole  中文名：奧硝唑  分子式：C7H10ClN3O3  度：98.0%

緊張素Ⅱ一型受體抗原   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   英文縮寫：   AT1R   規(guī)格：   48T/96T  Ophiopogonin D  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16  度：%
6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  中文名：  分子式：C5H6N4O3    乙醇脫氫酶（ADH）測定試劑盒（紫外比色法）

6-Amino-1,3-dimethyluracil  中文名：  分子式：C6H9N3O2    微量游離血紅蛋白（FHb）測定試劑盒（比色法）

6,7-Dihydroneridienone A  中文名：  分子式：C21H28O3    超微量Na+K+–ATP酶測定試劑盒

6,6'-Di-O-sinapoylsucrose  中文名：6,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19    胰蛋白酶測定試劑盒（紫外比色法）                 

6-(5-Chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin-5-one  中文名：  分子式：C11H7ClN4O2    乙醇酸氧化酶測試盒   可見分光光度法   50管/48樣
牛病毒PCR檢測試劑盒直銷DL色氨酸 HPLC≥98% 200mg 人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)試劑盒 Human TIMP-3 ELISA Kit

DL纈氨酸 HPLC≥98% 200mg RatCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

DL亮氨酸 HPLC≥98% 200mg 10%辛基-β-D-硫代葡萄糖苷(Octyl-β-D-thioglucopyranoside)1毫升

DL谷氨酸 HPLC≥98% 200mg MouseCalfiestinalalkalinephosphatase,CIAPELISA試劑盒小鼠牛小腸堿性0酸酶(CIAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

青霉素V鉀 HPLC≥97% 100mg 小鼠血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA 試劑盒

去氫茯苓酸  HPLC≥98% 10mg Rat muscarinic acetylcholine receptor (M-AChR) ELISA Kit 大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)ELISA試劑盒

刺五加苷D HPLC≥98% 20mg Humanα-galactosidase,αGALELISAKit 人α半乳糖苷酶(αGAL)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

葫蘆素IIA HPLC≥98% 10mg CLIAKitfor(Mouseai-IgEreceptoraibody)ELISAKit小鼠抗IgE受體抗體規(guī)格：48T/96T

β,β二甲基丙烯酰紫草素 HPLC≥98% 20mg 飲料總?cè)樗岜壬ǘ繖z測試劑盒20

黃華堿 HPLC≥98% 20mg MouseIerleukin4,IL-4ELISAKit小鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
香橙素，香樹素 HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin3,IL-3ELISA試劑盒兔子白介素3(IL-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小構(gòu)樹醇 B HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinA,IgAELISA試劑盒兔子球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小葉九里香內(nèi)酯 HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinE,IgEELISA試劑盒兔子球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小蕓木香豆精 HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinG,IgGELISA試劑盒兔子球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

瀉根醇酸 HPLC≥98% 5mg Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISA試劑盒兔誘導型合成酶(iNOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

辛可寧 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin,INSELISA試劑盒兔子胰島素(INS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

辛夷烯酮 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA試劑盒兔子胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

新比克白芷內(nèi)酯 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin-likegrowthfactor2,IGF-2ELISA試劑盒兔子胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

新槐胺 HPLC≥98% 5mg RabbitoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

星魚甾醇 HPLC≥98% 5mg RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit兔素B2(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。