技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：波氏桿菌通用PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
紅細(xì)胞NADH高鐵血紅蛋白還原酶測試盒   Erythrocyte NADH high iron hemoglobin reductase test kit                 4,5-Di-O-caffeoylquinic acid methyl ester  中文名：4,5-二咖啡酰奎寧酸甲酯  分子式：C26H26O12 

紅細(xì)胞NADH高鐵血紅蛋白還原酶測定試劑盒（比色法）  Repaglinide ethyl ester  147770-06-7  中文名：  分子式：C29H40N2O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

核轉(zhuǎn)錄因子NF-KB   英文名稱：   Nuclear anscription Factor NF-KB   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NF-KB  Tetracaine  94-24-6  中文名：丁卡因  分子式：C15H24N2O2 

河蟹5羥色胺   英文名稱：   5-Hydroxyyptamine   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   5-HT  Aspartame  22839-47-0  中文名：阿司帕坦  分子式：C14H18N2O5 

海藻糖含量試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣  Withanolide C  108030-78-0  中文名：醉茄內(nèi)酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  細(xì)胞毒活性; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
1-Actamido-3,5-dimethyladmantane  19982-07-1  中文名：  分子式：C14H23NO    人血小板反應(yīng)蛋白2(TSP-2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human TSP-2 (Thrombospondin-2) ELISA Kit              

Memantine hydrochloride  41100-52-1  中文名：鹽酸美金剛胺  分子式：C12H22ClN    人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒  

Valdecoxib  181695-72-7  中文名：帕瑞考昔  分子式：C16H14N2O3S    人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒  

Parecoxib   198470-85-8  中文名：帕瑞考昔鈉  分子式：C19H17N2NaO4S    人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒  

Naftifine hydrochloride  65473-14-5  中文名：鹽酸萘替芬  分子式：C21H22ClN    人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒
波氏桿菌通用PCR檢測試劑盒直銷天麻素  Gastrodin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，BR 小鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA檢測試劑盒MouseFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit 96T/48T

甜菊苷（標(biāo)準(zhǔn)品）  Stevioside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 人鈣結(jié)合蛋白(CR)試劑盒 Human Calretinin,CR ELISA Kit

土貝母苷甲（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tubeimoside I  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 RatIerleukin1,IL-1ELISAKit大鼠白介素1(IL-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

土荊皮乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  Pseudolaric Acid B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 CASPASE-3蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25

土木香內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Alantolactone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 MouseL-SelectinELISA試劑盒小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蛻皮激素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ecdysterone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒 ，英文名： ON ELISA Kit

脫水穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dehydroandrographolide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA檢測試劑盒RatPeroxisomeProliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γELISAKit 96T/48T

脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dehydroandrographolide succinate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品 人臂板蛋白3A(Sema 3A)試劑盒 Human Sema 3A ELISA Kit

脫水淫羊藿素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Anhydroicaritin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Ratverylateappearingaigen,VLAELISAKit大鼠遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

脫氧野尻霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)  1-Deoxynojirimycin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 N-Ras鳥苷酸酶活性分析試劑盒6
氨苯砜(標(biāo)準(zhǔn)品)  4,4'-Diaminodiphenylsulfone  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠可溶性內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒 ，英文名： sEPCR ELISA Kit

茶苯海明（標(biāo)準(zhǔn)品）  Dimenhydrinate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 小鼠可溶性細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA檢測試劑盒Mousesolublevasccularcelladhesionmolecule1,sVCAM-1ELISAKit 96T/48T

醋酸潑尼松龍（標(biāo)準(zhǔn)品）  Prednisolone acetate  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠可溶性血凝素樣氧化受體1(sLOX-1)ELISA試劑盒 ，英文名： sLOX-1 ELISA Kit

醋酸曲安奈德（標(biāo)準(zhǔn)品）  xx  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠可溶性調(diào)節(jié)蛋白(sTM)ELISA試劑盒 ，英文名： sTM ELISA Kit

達(dá)那唑（標(biāo)準(zhǔn)品）  Danazol  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA檢測試劑盒Mousesolubleplateletendothelialcelladhesionmolecule1,sPECAM-1ELISAKit 96T/48T

地蒽酚（標(biāo)準(zhǔn)品）  ANTHRALIN  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒 ，英文名： sPECAM-1/sCD31 ELISA Kit

對羥基苯乙酰胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  4-Hydroxyphenylacetamide  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠可溶性相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

奮乃靜（標(biāo)準(zhǔn)品）  Prochlorperazine  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠可溶性相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA試劑盒 ，英文名： sAIL ELISA Kit

奮乃靜  Prochlorperazine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA檢測試劑盒MouseClaracellprotein,CC16ELISAKit 96T/48T

TGX221  TGX-221  質(zhì)量規(guī)格：>98%,特異性的p110β抑制劑 小鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒 ，英文名： CC16 ELISA Kit