PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：同牛病毒2型牛乳頭炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

綠膿桿菌(PA)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  3-Quinuclidinone  3731-38-2  中文名：3-奎寧環(huán)酮  分子式：C7H11NO 

綠膿桿菌(PA)核酸檢測(cè)試劑盒   48T  3-Oxo-4-aza-5-alpha-androstane-17β-carboxylic acid  中文名：  分子式：C19H29NO3  度：98.0%

鹿胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISAKit     3-Benzalphthalide  575-61-1  中文名：3-亞芐基苯酞  分子式：C15H10O2 

鹿血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISAKit                 3-Aminopiperidine dihydrochloride  中文名：  分子式：C5H14Cl2N2 

鹿內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit     3-Aminopiperidine dihydrochloride  中文名：  分子式：C5H14Cl2N2  度：98.0%
Androstenediol-3-acetate  1639-43-6  中文名：雄甾烯二醇-3-乙酸酯  分子式：C21H32O3    人鐵蛋白(FE)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human FE (Ferritin) ELISA Kit               

Methenolone enanthate  303-42-4  中文名：美替諾龍庚酸酯  分子式：C27H42O3    人組織因子(TF)ELISA試劑盒  

Methenolone acetate  434-05-9  中文名：美替諾龍醋酸酯  分子式：C22H32O3    人組織型纖維溶酶激活物（t-PA）ELISA試劑盒  

Androst-2-en-17-one  963-75-7  中文名：5α-雄甾-2-烯-17-酮  分子式：C19H28O    人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒  

Epiandrosterone  481-29-8  中文名：表雄酮  分子式：C19H30O2    人組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因D（MICD）ELISA試劑盒
同牛病毒2型牛乳頭炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)具棲冬青苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  Pedunculoside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Porcinegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISA試劑盒豬生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

科羅索酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Corosolic Acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒 ，英文名： LPO ELISA Kit

可可堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Theobromine  質(zhì)量規(guī)格：≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA檢測(cè)試劑盒RatEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 96T/48T

苦參堿(標(biāo)準(zhǔn)品)  Matrine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 人氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)試劑盒 Human ALT/GPT ELISA Kit

苦參堿  Matrine  質(zhì)量規(guī)格：≥97%,BR Ratulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

D-(-)-奎寧酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  D-(?)-Quinic acid  質(zhì)量規(guī)格：≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 NAD濃度比色法定量檢測(cè)試劑盒20/80

辣椒堿,辣椒素（天然提取標(biāo)準(zhǔn)品）  Capsaicin  質(zhì)量規(guī)格：辣椒堿含量HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Porcinegrowthhormone,GHELISA試劑盒豬生長(zhǎng)激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

辣椒堿,辣椒素(天然提取)  Capsaicin  質(zhì)量規(guī)格：辣椒總堿>98%,辣椒單堿>55% 小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒 ，英文名： PPAR-γ ELISA Kit

辣椒堿,辣椒素(合成)  Capsaicin  質(zhì)量規(guī)格：>99% 大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit 96T/48T

萊苞迪甙C（標(biāo)準(zhǔn)品）  Rebaudioside C  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 人別孕烯醇酮/3α,5α-四氫孕酮(AP/3α,5α-THP)試劑盒 Human allopregnanolone/3α,5α-teahydroprogesterone,AP/3α,5α-THP ELISA kit
白鮮堿(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dictamnine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21AELISAKit 96T/48T

羅替戈汀  Rotigotine  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 人細(xì)胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21BELISAKit 96T/48T

鹽酸羅替戈汀  Rotigotine Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 人細(xì)胞外基質(zhì)0酸糖蛋白(MEPE)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanmaixexacellularphosphoglycoprotein,MEPEELISAKit 96T/48T

右雷佐生鹽酸鹽;右丙亞胺鹽酸鹽  Dexrazoxane HCl  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanplasmin/fibrinolysin,PL/FbnELISAKit 96T/48T

SGI-1776  SGI-1776；SGI1776  質(zhì)量規(guī)格：>98%,Pim1抑制劑 人纖調(diào)蛋白(fibromodulin)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanfibromodulinELISAKit 96T/48T

JNJ-26854165 (Serdemetan)  JNJ 26854165  質(zhì)量規(guī)格：>98% 人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanFibrinogenlikepeptide2,fgl2ELISAKit 96T/48T

SB505124  SB-505124  質(zhì)量規(guī)格：>98% 人纖維連接素相關(guān)抗原(FRA)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanfibronectioelatedaigen,FRAELISAKit 96T/48T

NLG919  NLG-919  質(zhì)量規(guī)格：>98%,IDO抑制劑 人纖維母細(xì)胞表面抗原(FSP)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanFibroblastsurfaceprotein,FSPELISAKit 96T/48T

維莫德吉(GDC0449)  Vismodegib;GDC-0449  質(zhì)量規(guī)格：>98%,hedgehog抑制劑 人酰輔酶A羧化酶β多肽(PCCB)試劑盒 Human PCCB ELISA Kit

Zosuquidar；LY335979  LY-335979  質(zhì)量規(guī)格：>98% 人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit 96T/48T
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。