技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：弗氏檸檬酸桿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
生成素 -2(Angiopoietin-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3  度：98.0%

內(nèi)皮抑素 (Endostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxandrolone  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3  度：98.0%

內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子 -1(VCAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Androstanolone acetate  1164-91-6  中文名：雄諾龍醋酸酯  分子式：C21H32O3 

內(nèi)皮生長因子受體3   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-R3  Otophylloside T  中文名：  分子式：C48H70O18 

內(nèi)皮生長因子受體2   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-R2  Otophylloside T  中文名：  分子式：C48H70O18  度：98.0%
6β-Hydroxystigmast-4-en-3-one  中文名：6β-羥基豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O2    乙酰L-肉堿鹽酸鹽   100g

6-O-Methylcerevisterol  中文名：  分子式：C29H48O3    Acetyl-L-carnitinehydrochlorid

6-O-Feruloylglucose  中文名：6-O-阿魏酰葡萄糖  分子式：C16H20O9    橙   1g

6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose  中文名：6-O-對羥基苯甲酰葡萄糖  分子式：C13H16O8    AcridineOrange,hemi(zincchloride)salt   10g              

6-Hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one  中文名：  分子式：C29H46O2    乙肟   500ml
弗氏檸檬酸桿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)N甲基野靛堿 HPLC≥98% 20mg 10%蛋白電泳分離預(yù)制膠溶液500毫升

N去甲基荷葉堿 HPLC≥98% 20mg MouseCalcitonin,CTELISA試劑盒小鼠降鈣素(CT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

OXi HPLC≥98% 20mg 小鼠血小板激活因子乙酰水解酶2(PAFAH2)ELISA試劑盒 ，英文名： PAFAH2 ELISA Kit

PinocembrinO(''galloyl'',''(S)hexahydroxydiphenoyl)βDglucose HPLC≥98% 20mg 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA檢測試劑盒rabbitmaixmetalloproteinase9,MMP-9ELISAKit 96T/48T

RTA HPLC≥98% 10mg 犬白介素2(IL-2)試劑盒 Canine Ierleukin 2,IL-2 ELISA Kit

S HPLC≥98% 20mg 英文名稱HumanAquaporin4ELISAKit人水通道蛋白4(AQP4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

SN HPLC≥98% 20mg 大鼠PGES基因甲基化檢測試劑盒20

Tafluposide HPLC≥98% 20mg Ratlipolysaccharidebindingprotein,LBPELISA試劑盒大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Terameprocol HPLC≥98% 20mg 小鼠血小板激活因子(PAF)ELISA試劑盒 ，英文名： PAF ELISA Kit

Tesetaxel HPLC≥98% 20mg 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA檢測試劑盒rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit 96T/48T
香紫蘇醇 GC≥98% 20mg HumanPerforin/Pore-formingprotein,PF/PFPELISAKit 人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

香紫蘇二醇 GC≥98% 20mg HumanPhosphoglucomase,PGMELISAKit 人0酸葡萄糖變位酶(PGM)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

香紫蘇內(nèi)酯 GC≥98% 20mg HumanPhospholipaseC,PLCELISAKit 人0酯酶C(PLC)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

消旋山莨菪堿 HPLC≥98% 20mg HumanPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit 人0酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

小白菊內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg Humanplasmin/fibrinolysin,PL/FbnELISAKit 人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

小檗胺 HPLC≥98% 20mg HumanplateletmembraneglycoproteinⅣ,GP-ⅣELISAKit 人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

小檗紅堿 HPLC≥98% 20mg HumanpoiculinELISAKit 人膜橋蛋白(poiculin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

小檗紅堿硫酸酯 HPLC≥98% 20mg HumanPolymorphonuclearElastase,PMNElastaseELISAKit 人多形核白細(xì)胞彈性蛋白酶(PMNElastase)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

小檗堿 HPLC≥98% 20mg Humanprealbumin,PAELISAKit 人前白蛋白(PA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

小豆蔻明 HPLC≥98% 20mg humanprolactin,PRLELISAKit 人催乳素(PRL)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝