PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：索氏梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

突觸核蛋白   英文名稱：   Human α Synucleinα   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   α-SYN  4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  52298-44-9  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

頭孢芐   1g  Amprolium hydrochloride  中文名：鹽酸氨丙林  分子式：C14H20Cl2N4  度：98.0%

銅蘭蛋白（CP）檢測(cè)   Glamate detection                 β-Anhydrouzarigenin  3080-20-4  中文名：  分子式：C23H32O3 

銅－ATP酶（Cu-ATPase）測(cè)定試劑盒（比色法）                    Repaglinide ethyl ester  147770-06-7  中文名：  分子式：C29H40N2O4 

銅（Cu）測(cè)定試劑盒（絡(luò)合比色法）  Xanthopurpurin  518-83-2  中文名：1,3-二羥基蒽醌  分子式：C14H8O4  度：97.0%  關(guān)鍵詞：
Withaperuvin C  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶 1   英文名稱：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-1

Otophylloside O  中文名：  分子式：C56H84O20  度：96.5%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶 2   英文名稱：   Rabbit Maix Metalloproteinase 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-2

Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H84O20  度：92.0%  兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit  

Otophylloside F  中文名：青陽(yáng)參苷F  分子式：C48H76O16  度：95.0%  兔(NO)ELISAKit  

Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19  度：98.0%  兔補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISAKit
索氏梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書頭孢匹林鈉   Cefapirin   質(zhì)量規(guī)格：Content 96.0-102.0%,BR 人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanAi-Saccharomycescerevisiaeaibody,ASCAELISAKit 96T/48T

5,7-二氯-8-羥基喹哪啶;氯喹那多  Chlorquinaldol  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒 Rat Cardiac oponin Ⅰ,cTn-Ⅰ ELISA kit

癸氧喹酯;乙癸氧喹酯  Decoquinate  質(zhì)量規(guī)格：>99(T) 英文名稱RatTpPELISAKit大鼠前體蛋白(TpP)。規(guī)格：96T/48T

(S)-2-氨基-5-甲氧基四氫萘鹽酸鹽   (S)-2-Amino-5-methoxytetralin Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>98% 寡核苷酸探針?lè)峭凰?/span>HRP化學(xué)發(fā)光法RNA北方雜交完全試劑盒5

巴馬司他;BB94  Batimastat(BB-94)  質(zhì)量規(guī)格：>98%,MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑 ELISAKitIGFBP-1人樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1規(guī)格：48T/96T

伊洛馬司他(GM6001)  Ilomastat,GM6001,Galardin  質(zhì)量規(guī)格：>98%,MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑 小鼠激肽釋放酶4(KLK4)ELISA試劑盒 ，英文名： KLK4 ELISA Kit

愈創(chuàng)木酚縮水甘油醚   Guaiacol glycidyl ether  質(zhì)量規(guī)格：>98% 人抗髓0脂抗體IgA(ai-myelinAb)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanai-myelinaibodyIgAELISAKit 96T/48T

4-氨基安替比林  4-Aminoantipyrine  質(zhì)量規(guī)格：AR,分析 大鼠腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)試劑盒 Rat adenylyl cyclase 1,AC-1 ELISA Kit

N-代丁二(NBS)  N-bromosuccinimide  質(zhì)量規(guī)格：AR 英文名稱RatSerumamyloidAELISAKit大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)規(guī)格：96T/48T

溶葡球菌酶,溶葡萄球菌酶   Lysostaphin  質(zhì)量規(guī)格：BR,5000U/Pack 寡核苷酸探針同位素法DNA斑點(diǎn)雜交完全試劑盒5
丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)  Butachlor solution  質(zhì)量規(guī)格：0.100mg/ml 犬KI-67抗原(MKI67)試劑盒 Dog aigen KI-67,MKI67 ELISA kit

丁草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Butachlor  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,95% 犬N端前腦素(-proBNP)試劑盒 Canine N-terminal pro-brain naiuretic peptide,-proBNP ELISA Kit

丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)  Butachlor solution  質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4% 犬N端前心肽(-ProANP)試劑盒 Dog N-terminal Pro aial naiuretic peptide,-ProANP ELISA kit

丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%)  Butachlor solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=7% 犬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒 Canine N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit

炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)  Buturon  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬P物質(zhì)受體(TACR1)試劑盒 Dog Substance-P receptor,TACR1 ELISA kit

螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)  Bromopropylate solution  質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% 犬P選擇素(SELP)試劑盒 Dog P-selectin,SELP ELISA kit

螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)  Bromopropylate solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=2% 犬S100B蛋白(S100B)試劑盒 Dog S100 calcium binding protein B,S100B ELISA kit

硝醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Bronopol  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)試劑盒 Canine S100 calcium binding protein A12/Calgranulin-C,S100A12 ELISA Kit

氟草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Benfluralin  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬α-1/2干擾素(IFN-α1/2)試劑盒 Canine Ierferon alpha-1/2 ELISA kit

苯并(k)熒蒽(標(biāo)準(zhǔn)品)  Benzo(k)fluoranthene  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬α1微球蛋白(α1-MG)試劑盒 Canine α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。