技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：粗球孢子菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
土壤纖維素酶（S-CL）測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  2374-03-0  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%   

土壤無機(jī)0（S-PHOS）含量測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  116-63-2  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%   

土壤無機(jī)0（S-PHOS）含量測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%

土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/24樣              4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O 

土壤酸性蛋白酶試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S  度：99.0%
Pregn-5-ene-3β,17α,20S-triol  中文名：  分子式：C21H34O3  度：98.0% 

Qingyangshengenin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-digitoxopyranoside  中文名：  分子式：C41H58O14  度：97.5%  兔血小板活化因子(rabbit PAF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Periplocoside O  中文名：北五加皮苷O  分子式：C36H56O10  度：98.0%  兔素E2(rabbit PGE2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Otophylloside T  中文名：  分子式：C48H70O18  度：98.0%  兔纖溶酶原激活劑抑制物-1 (rabbit PAI-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Periplocoside M  中文名：北五加皮苷M  分子式：C34H52O9  度：98.0%  兔相關(guān)蛋白A(rabbit PAPP-A)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝
粗球孢子菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷鹽酸氟哌噻噸  Flupenthixol dihydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanUreaplasmaurealyticumaibody,UU-AbELISAKit 96T/48T

茶多酚;綠茶提取物  Tea polyphenol  質(zhì)量規(guī)格：多酚含量≥98 大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒 Rat cardiac isoform of opnin T,c ELISA Kit

四氫姜黃素   Tetrahydrocurcumin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,BR 英文名稱RatThromboxaneB2ELISAKit大鼠素(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

管花苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)  Tubuloside A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98,標(biāo)準(zhǔn)品 寡核苷酸探針非同位素HRP-DAB顯色法RNA北方雜交完全試劑盒5

2’-乙酰基毛蕊花糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  2'-Acetylacteoside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 ELISAKitIGFBP-4人樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4規(guī)格：48T/96T

鹽酸右美托咪定  Dexmedetomidine HCl  質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BR 小鼠極受體(VLDLR)ELISA試劑盒 ，英文名： VLDLR ELISA Kit

地夫可特  Deflazacort  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA檢測(cè)試劑盒RatsubstancePreceptor,SP-RELISAKit 96T/48T

D-(-)-泛酰內(nèi)酯   D-(-)-Pantolactone  質(zhì)量規(guī)格：>99% 人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(FGF9)試劑盒 Human FGF9 ELISA kit

鹽酸丁咯地爾   Buflomedil HCl  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR RatStemCellFactorReceptor,SCFRELISAKit大鼠干細(xì)胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鹽酸丁咯地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)  Buflomedil HCl  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 IP3R受體蛋白表達(dá)檢測(cè)試劑盒20
豆甾醇 HPLC≥95% 20mg Chickeoxoplasmacirculatingaigen,TCAELISA試劑盒雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

毒扁豆堿 HPLC≥98% 20mg Chickeumornecrosisfactorα,TNF-αELISA試劑盒雞α(TNF-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

獨(dú)活素 HPLC≥98% 20mg ChikenPullorumDiseaes,PDELISA試劑盒雞白痢抗體檢測(cè)(PD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

杜鵑素 HPLC≥99% 20mg CHROMOMYCINA3細(xì)胞核形態(tài)染色試劑盒50

短葶山麥冬皂苷C HPLC≥95% 20mg Chu’sN6基礎(chǔ)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑

短葉蘇木酚酸 HPLC≥98% 20mg Chu’sN6完全培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑

斷血流皂苷A HPLC≥98% 20mg Chymoypsin

對(duì)甲氧基肉桂酸乙酯 HPLC≥95% 20mg cit瓜氨酸規(guī)格：96T/48T

對(duì)羥基 HPLC≥99% 100mg CLEAR&PURE潔手露10毫升/瓶

對(duì)羥基苯甲酸 HPLC≥99% 100mg CLIAKitfor(ADAM9)ELISAKit大鼠解整合素樣金屬蛋白酶9規(guī)格：48T/96T