PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：波薩達(dá)斯球孢子菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

土壤中性0酸酶（S-NP）試劑盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%

土壤中性0酸酶(S-NP)測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  4-Aminobenzophenone  1137-41-3  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

土壤蔗糖酶(S-SC)測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/24樣              4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S 

土壤硝態(tài)氮測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  Triamcinolone acetonide  76-25-5  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

土壤纖維素酶（S-CL）試劑盒   可見(jiàn)分光光度法    50管/24樣  4-Aminoantipyrine  1983/7/8  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%  關(guān)鍵詞：
Rubioncolin C  中文名：  分子式：C27H22O6  度：98.0%  兔子白三烯B4elisa試劑盒   兔子白三烯B4試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子白三烯B4試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子白三烯B4試劑盒、兔子白三烯B4 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Danshenxinkun A  中文名：丹參新醌甲  分子式：C18H16O4  度：98.0%  人組織相容性2-K1-K區(qū)elisa試劑盒   人組織相容性2-K1-K區(qū)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織相容性2-K1-K區(qū)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織相容性2-K1-K區(qū)試劑盒、人組織相容性2-K1-K區(qū)elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Przewaquinone A  中文名：紫丹參甲素  分子式：C19H18O4  度：98.0%  兔(rabbit NO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Deoxyneocryptotanshinone  中文名：  分子式：C19H22O3  度：97.5%  兔合酶(rabbit NOS)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

甾體        兔神經(jīng)元烯醇化酶(rabbit NSE)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝
波薩達(dá)斯球孢子菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書鹽酸阿糖胞苷  1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 英文名稱RatNOELISAKit大鼠(NO)ELISA規(guī)格：96T/48T

鹽酸阿糖胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HCl  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 寡核苷酸探針?lè)峭凰?/span>HRP-DAB顯色法DNA南方雜交完全試劑盒5

鹽酸馬尼地平  Manidipine Dihydrochlorid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR ELISAKitPI人原規(guī)格：48T/96T

鹽酸馬尼地平(標(biāo)準(zhǔn)品)  Manidipine Dihydrochlorid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒 ，英文名： HK ELISA Kit

二氫睪酮,雄諾龍  Stanolone/Androstanolone  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 大鼠P物質(zhì)(SP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatSubstanceP,SPELISAKit 96T/48T

多拉菌素  Doramectin  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 人程序性死亡-1(PD-1)試劑盒 Human PD-1 ELISA Kit

3,3,5-三-L-甲狀腺原氨酸，塞羅寧  3,3',5'-Triiodo-L-thyronine  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR RatSomatostatin,SSELISAKit大鼠生長(zhǎng)抑素(SS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Corylifol A(標(biāo)準(zhǔn)品)  Corylifol A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98,標(biāo)準(zhǔn)品 IP3R受體蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25

芬酸鈉  Bromfenac   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Pisumsativumagglinin,PSAELISA試劑盒豌豆凝集素(PSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

芬酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)  Bromfenac   質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠幾丁質(zhì)酶1(CHIT1)ELISA試劑盒 ，英文名： CHIT1 ELISA Kit
豆甾醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  Stigmasterol  質(zhì)量規(guī)格：95%,標(biāo)準(zhǔn)品,大豆來(lái)源 小鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit 96T/48T

豆甾醇  Stigmasterol  質(zhì)量規(guī)格：>90 %,GC 小鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA試劑盒 ，英文名： u-T4 ELISA Kit

豆甾醇  Stigmasterol  質(zhì)量規(guī)格：>90%,GC 小鼠高敏三甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3ELISAKit 96T/48T

硝呋烯腙鹽酸鹽  Nitrovin HCL,Difurazone  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠高敏狀腺原酸(u-T3)ELISA試劑盒 ，英文名： u-T3 ELISA Kit

杜鵑素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Farrerol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠高遷移率族蛋白1(HMG1)ELISA試劑盒 ，英文名： HMG1 ELISA Kit

對(duì)香豆酸;對(duì)羥基肉桂酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  p-Coumaric acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠高遷移率族蛋白1(HMGB1)ELISA試劑盒 ，英文名： HMGB1 ELISA Kit

對(duì)葉百部堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tuberstemonine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 ，英文名： HMGB-1 ELISA Kit

莪術(shù)醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Curcumol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒 ，英文名： MHB ELISA Kit

莪術(shù)二酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  Curdione  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠高鐵血紅蛋白還原酶(MHBR)ELISA試劑盒 ，英文名： MHBR ELISA Kit

蒽醌(標(biāo)準(zhǔn)品)  Anthraquinone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠睪酮(T)ELISA試劑盒 ，英文名： T ELISA Kit
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。