技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：茹拉巴德古柏線蟲PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
兔促卵泡素(rabbit FSH)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C18H27N3O4  度：98.0%

兔雌二醇(rabbi E2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Amino-1-naphthol  中文名：5-氨基-1-萘酚  分子式：C10H9NO  度：98.0%

兔超氧化物歧化酶   英文名稱：   Rabbit Superoxide Dismase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SOD  4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide  中文名：4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚  分子式：C20H16OS 

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒              4-Difluoromethoxy-3-hydroxybenzaldehyde  中文名：  分子式：C8H6F2O3 

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISAKit                 5-Acetyl-3-chloro-10,11-dihydro-5H-dibenz[b,f]azepine  中文名：  分子式：C16H14ClNO
Rubiadin  中文名：甲基異茜草素  分子式：C15H10O4  度：99.0%  兔誘導(dǎo)型NO合酶elisa試劑盒   兔誘導(dǎo)型NO合酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔誘導(dǎo)型NO合酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔誘導(dǎo)型NO合酶試劑盒、兔誘導(dǎo)型NO合酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Damnacanthal  中文名：虎刺醛  分子式：C16H10O5  度：98.0%  荊豆凝集素elisa試劑盒   荊豆凝集素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   荊豆凝集素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：荊豆凝集素試劑盒、荊豆凝集素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Xanthorin  中文名：  分子式：C16H12O6  度：%  兔子S100B蛋白(S-100B)ELISAKit  

2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  中文名：  分子式：C15H10O3  度：%  兔子S100蛋白(S-100)ELISAKit  

Citreorosein  中文名：ω-羥基大黃素  分子式：C15H10O6  度：97.0%  兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISAKit
茹拉巴德古柏線蟲PCR檢測(cè)試劑盒說明書熒光素  Fluorescein  質(zhì)量規(guī)格：AR RatSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit大鼠S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鈣黃綠素  Calcein  質(zhì)量規(guī)格：IND IL蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25

瑞氏色素  Wright's stain  質(zhì)量規(guī)格：BS NudemouseAlpha-fetoprotein,AFPELISA試劑盒裸鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

吉氏色素,姬姆氏色素  Giemsa stain  質(zhì)量規(guī)格：BS 小鼠甲狀腺素(T4)ELISA 試劑盒

6-FAM, SE;6-羧基熒光素琥珀酯  6-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester  質(zhì)量規(guī)格：0.9 Rat soluble Toll like receptor 6 (sTLR6) ELISA Kit 大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒

6-FAM ；6-羧基熒光素  6-Carboxyfluorescein  質(zhì)量規(guī)格：0.95 HumanMannmabindinglectieceptor,MBLRELISAKit 人甘露糖凝集素受體(MBLR)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

5-FAM ；5-羧基熒光素  5-Carboxyfluorescein  質(zhì)量規(guī)格：>95% Humanai-exactablenuclearaigenaibody,ENA-AbELISA試劑盒人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

黑色素(水溶)  Nigrosine water soluble  質(zhì)量規(guī)格：BS 植物精氨酸(arginine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20

黑色素(醇溶）  Nigrosin alcohol soluble  質(zhì)量規(guī)格：BS HumanVitaminD3，VD3ELISAKit人維生素D3(VD3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

7-羥基香豆素;傘形花內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  7-Hydroxycoumarin  質(zhì)量規(guī)格：GC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒 ，英文名： TG ELISA Kit
蒽醌  Anthraquinone  質(zhì)量規(guī)格：AR,>98% 小鼠睪酮(Testoterone)ELISA試劑盒 ，英文名： Testoterone ELISA Kit

1,3-二咖啡酰奎寧酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  Cynarin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseLebtospiraIgGELISAKit 96T/48T

洋薊素;1,5-二咖啡酰奎寧酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  1,5-Dicaffeoylquinic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA試劑盒 ，英文名： Lep IgG ELISA Kit

二氫丹參酮I（標(biāo)準(zhǔn)品）  Dihydrotanshinone I  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠孤啡肽(OFQ)ELISA試劑盒 ，英文名： OFQ ELISA Kit

二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Columbianadin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit 96T/48T

二氫楊梅素  Dihydromyricetin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，BR 小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA試劑盒 ，英文名： OFQ/N ELISA Kit

二氫楊梅素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dihydromyricetin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseglamicaciddecarboxylaseaoaibody,GAD-AbELISAKit 96T/48T

番瀉苷A（標(biāo)準(zhǔn)品）  Sennoside A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠谷光甘肽合成酶(GSS)ELISA試劑盒 ，英文名： GSS ELISA Kit

番瀉苷B（標(biāo)準(zhǔn)品）  Sennoside B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒 ，英文名： GSH ELISA Kit

防己諾林堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Fangchinoline  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)ELISA試劑盒 ，英文名： GSTα1 ELISA Kit