PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：牛棒桿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

兔兒茶酚胺EAelisa試劑盒   兔兒茶酚胺EA試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔兒茶酚胺EA試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔兒茶酚胺EA試劑盒、兔兒茶酚胺EAelisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  4-Chlorodehydromethyltestosterone  2446-23-3  中文名：4-氯去氫甲基睪酮  分子式：C20H27ClO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒     4-Difluoromethoxy-3-hydroxybenzaldehyde  中文名：  分子式：C8H6F2O3  度：98.0%

兔兒茶酚胺(CA)ELISAKit     4-Chloro-6-iodoquinazoline  98556-31-1  中文名：  分子式：C8H4ClIN2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔蛋白激酶A   英文名稱：   Rabbit Protein Kinase A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PKA  4-Hydroxysapriparaquinone  中文名：  分子式：C20H26O4 

兔單核細胞趨化蛋白-1(rabbit MCP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-Methylamino-3-nitrobenzoic acid  41263-74-5  中文名：  分子式：C8H8N2O4
Torososide A  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  兔子TH糖蛋白(THP)ELISA試劑盒  

Floribundone 1  中文名：  分子式：C32H22O10  度：99.0%  兔子S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒  

Rubianthraquinone  中文名：  分子式：C16H12O5  度：98.0%  兔子S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒           

6-Hydroxyrubiadin  中文名：6-羥基甲基異茜草素  分子式：C15H10O5  度：97.5%  兔子α2抗纖溶酶elisa試劑盒   兔子α2抗纖溶酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子α2抗纖溶酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子α2抗纖溶酶試劑盒、兔子α2抗纖溶酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

1,5,15-Tri-O-methylmorindol  中文名：  分子式：C18H16O6  度：98.0%  兔增殖細胞核抗原elisa試劑盒   兔增殖細胞核抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔增殖細胞核抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔增殖細胞核抗原試劑盒、兔增殖細胞核抗原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
牛棒桿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)苦玄參苷IV(標準品)  Picfeltarraenin IV  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品 ELISAKitPP人胰多肽規(guī)格：48T/96T

瓜子金皂苷XXXI(對照品)  Polygalasaponin XXXI  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品 小鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒 ，英文名： TAb ELISA Kit

俾斯麥棕R  Bismarck Brown R  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISA檢測試劑盒Ratinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKIT 96T/48T

俾斯麥棕Y  Bismarck Brown Y  質(zhì)量規(guī)格：BS 人雌激素(E)試劑盒 Human esogen,E ELISA Kit

偶氮氯膦I  Chlorophosphonazo Ⅰ  質(zhì)量規(guī)格：AR,顯色劑 RatSolubleprotein-100,S-100ELISAKit大鼠S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

香豆素（標準品）  Coumarin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 IKB-α(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克

茜素  Alizarin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 Nasoniaviipennisvitellogenin,VtgELISA試劑盒蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原(vtg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

姜黃素  Curcumin  質(zhì)量規(guī)格：姜黃素類化合物>95%,姜黃素>75%,去甲氧基姜黃素<20% 小鼠甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒 ，英文名： T4 ELISA Kit

姜黃素（標準品）  Curcumin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品 大鼠合成酶(NOS)ELISA檢測試劑盒Ratniicoxidesyhase,NOSELISAKit 96T/48T

姜黃素（高）  Curcumin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,BR 人雌二醇受體(ER)試劑盒 Human Esadiol receptor,ER ELISA Kit
二苯并-15-冠5-醚(>95.0%(GC))  Dibenzo-15-crown 5-Ether  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 小鼠組蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC4 ELISA Kit

二苯并-21-冠7-醚(>96.0%(GC))  Dibenzo-21-crown 7-Ether  質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC) 小鼠組蛋白脫乙酰基酶1(HDAC1)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit

4'-甲酰苯并-15-冠-5-醚(>98.0%(GC))  4'-Formylbenzo-15-crown 5-Ether  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 小鼠組蛋白脫乙酰基酶2(HDAC2)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC2 ELISA Kit

4'-甲酰苯并-18-冠-6-醚(>98.0%(GC))  4'-Formylbenzo-18-crown 6-Ether  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 小鼠組蛋白脫乙酰基酶4(HDAC4)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC4 ELISA Kit

4,7,13,21,24-六氧雜-1,10-二氮雜雙環(huán)[8,8,8]-二十六烷(>98.0%(GC)(T))  4,7,13,16,21,24-Hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) 小鼠組蛋白脫乙酰酶(HDAC1)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit

2-(羥甲基)-12-冠4-醚(>95.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-12-crown 4-Ether  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 小鼠組酸豐富糖蛋白(HRG)ELISA試劑盒 ，英文名： HRG ELISA Kit

2-(羥甲基)-15-冠5-醚(>96.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-15-crown 5-Ether  質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC) 小鼠組織蛋白酶A(CTSA)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSA ELISA Kit

2-(羥甲基)-18-冠6-醚(>93.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-18-crown 6-Ether  質(zhì)量規(guī)格：>93.0%(GC) 小鼠組織蛋白酶B(CTSB)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSB ELISA Kit

1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷(>98.0%(T))  1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 小鼠組織蛋白酶D(CTSD)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSD ELISA Kit

1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷三鹽酸鹽(>98.0%(N)(T))  1,4,7-Triazacyclononane Trihydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)(T) 小鼠組織蛋白酶G(CTSG)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSG ELISA Kit
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。