技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：16柯薩奇病毒16型變種PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
兔堿性成纖維細(xì)胞生長因子   英文名稱：   Rabbit Basic Fibroldast Growth Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BFGF  4β-Hydroxywithanolide E  54334-04-2  中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E  分子式：C28H38O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  蛻皮甾體拮抗劑; ; 酸漿屬; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔堿性成纖維生長因子(rabbit b-FGF/FGF-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C18H27N3O4 

兔堿性0酸酶(ALP)ELISA試劑盒     5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde  中文名：  分子式：C26H17ClFN3O3  度：98.0%

兔基質(zhì)細(xì)胞衍化生長因子1a   英文名稱：   Rabbit Somal cell Derived Factor 1a   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SDF1a  4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide  中文名：4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚  分子式：C20H16OS  度：98.0%

兔基質(zhì)金屬蛋白酶-9(rabbit MMP-9)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  中文名：  分子式：C18H24N4O18
3-(Hydroxymethyl)cyclopentanol  中文名：  分子式：C6H12O2  度：%  兔子催乳素(PRL)ELISA試劑盒  

Decanedioic acid  中文名：  分子式：C10H18O4  度：%  兔子促上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒           

2-(2'-Hydroxytetracosanoylamino)-octadecane-1,3,4-triol tetraacetate  中文名：  分子式：C50H93NO9  度：96.0%  兔子促甲狀腺素elisa試劑盒   兔子促甲狀腺素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子促甲狀腺素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子促甲狀腺素試劑盒、兔子促甲狀腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Momor-cerebroside I  中文名：  分子式：C48H93NO10  度：95.0%  兔子促黃體激素elisa試劑盒   兔子促黃體激素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子促黃體激素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子促黃體激素試劑盒、兔子促黃體激素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Rengyol  中文名：連翹環(huán)己醇  分子式：C8H16O3  度：97.5%  兔子雌二醇elisa試劑盒   兔子雌二醇試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子雌二醇試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子雌二醇試劑盒、兔子雌二醇elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
16柯薩奇病毒16型變種PCR檢測(cè)試劑盒說明書N-乙酰甘氨酸  N-Acetylglycine  質(zhì)量規(guī)格：>98% 英文名稱MouseHAELISAKit小鼠透明質(zhì)酸(HA)規(guī)格：96T/48T

N-乙酰-L-丙氨酸  Ac-Ala-OH  質(zhì)量規(guī)格：98%,BR SYBR綠色熒光核酸染色(20X)0.5毫升

N-乙酰-D-丙氨酸  N-Acetyl-D-alanine  質(zhì)量規(guī)格：98%,BR rabbitiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1/CD54ELISA試劑盒兔子細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-乙酰-L-谷氨酰胺  N-Acetyl-L-Glutamine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠降鈣素原(PCT)ELISA試劑盒 ，英文名： PCT ELISA Kit

N-乙酰-L-酪氨酸  N-Acetyl-L-Tyrosine  質(zhì)量規(guī)格：0.98 大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratheatshockprotein20,hSP-20ELISAKit 96T/48T

甲基橙(生物染色)  Methyl orange  質(zhì)量規(guī)格：BS 人氧化酶試劑盒 Human Hypoxahine Oxidase ELISA Kit

分散橙13  Disperse Orange 13  質(zhì)量規(guī)格：90%，進(jìn)口分包 RatsolubleIerleukin6receptor,sIL-6RELISAKit大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

酸性橙74  Acid Orange 74  質(zhì)量規(guī)格：>85% humanherpesvirusesRFLP基因分析試劑盒20

煌橙,藏花橙G  Crocein Orange G  質(zhì)量規(guī)格：BS Mouseβ-Defensins,β-DFELISA試劑盒小鼠β-防御素(β-DF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

靛紅（吲哚醌）  Isatin  質(zhì)量規(guī)格：AR 小鼠降鈣素受體(C)ELISA 試劑盒
二氫魚藤酮 HPLC≥98% 20mg CYTOCHROMEC蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25

二氫醉椒素 HPLC≥98% 10mg CYTOCHROMEC蛋白共沉淀分析試劑盒5

二十八烷醇 GC≥98% 20mg DAPI復(fù)染試劑盒50

二乙酰基大花旋覆花內(nèi)酯 HPLC≥98% 10mg DAPKINASE蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25

法卡林二醇 HPLC≥98% 10mg DAPKINASE蛋白共沉淀分析試劑盒5

番茄紅素 HPLC≥90% 20mg DA高效液相色譜電化學(xué)定量檢測(cè)試劑盒20

番茄堿 HPLC≥98% 20mg DEAE噬菌體DNA化樹脂制備試劑盒1

番瀉苷A HPLC≥98% 20mg DeerSerumamyloidA,SAAELISA試劑盒鹿血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

番瀉苷B HPLC≥98% 20mg DEPC處理試劑盒100

番瀉苷C HPLC≥98% 10mg DEPC水500毫升