PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：新生隱球菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

兔內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISAkit     4-Aminobutyric acid  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2  度：98.0%

兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒、兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Benzyloxyindole  中文名：5-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO  度：98.0%

兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒     5-Benzyl-1H-tetrazole  中文名：5-芐基-1H-四唑  分子式：C8H8N4O  度：98.0%

兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISAKit                 6-Hydroxyrubiadin  中文名：6-羥基甲基異茜草素  分子式：C15H10O5 

兔內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(rabbit VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile  147619-40-7  中文名：  分子式：C7H5ClN2O2
Acetylatractylodinol  中文名：乙酰蒼術(shù)素醇  分子式：C15H12O3  度：97.5%  兔子葡萄糖依賴性釋放多肽(GIP)ELISAKit  

Atractylodin  中文名：蒼術(shù)素  分子式：C13H10O  度：98.0%  兔子細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISAKit  

Crenulatin  中文名：大花紅天素  分子式：C11H20O6  度：98.5%  兔子細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISAKit  

1-Monopalmitin  中文名：1-棕櫚酸單甘油酯  分子式：C19H38O4  度：98.0%  兔子透明質(zhì)酸(HA)ELISAKit               

Ethyl β-D-apiofuranoside  中文名：  分子式：C7H14O5  度：98.0%  兔子皮質(zhì)/上腺(CO)ELISA試劑盒
新生隱球菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷D-半胱氨酸鹽酸鹽一水  D-Cysteine hydrochloride monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：度大于98%,BR，一水物 ratCoicosterone,COELISA試劑盒大鼠皮質(zhì)同/腎上腺同(CO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鈣蛋白酶抑制劑II(進(jìn)口)  Calpain Inhibitor II(ALLM)  質(zhì)量規(guī)格：≥95%,美國(guó)進(jìn)口 小鼠靜止素Q6硫基氧化酶1(QSOX1)ELISA試劑盒 ，英文名： QSOX1 ELISA Kit

炔孕酮/素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ethisterone  質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanα2-Aiplasmin,α2-APELISAKit 96T/48T

炔孕酮/素  Ethisterone  質(zhì)量規(guī)格：>98% 大鼠生成素1(ANG-1)試劑盒 Rat Angiopoietin 1,ANG-1 ELISA Kit

D-胱氨酸  D-Cystine  質(zhì)量規(guī)格：0.98 英文名稱RatinducibleniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)規(guī)格：96T/48T

DL-色氨酸  DL-Tryptophan  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 高質(zhì)化膠回收試劑盒20

DL-絲氨酸  DL-Serine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,可用于細(xì)胞培養(yǎng) ELISAKithNP/RA33人異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物規(guī)格：48T/96T

L-蛋氨酸;甲硫氨酸  L-Mine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠精酸酶(Arg)ELISA試劑盒 ，英文名： Arg ELISA Kit

DL-苯丙氨酸  DL-Phenylalanine  質(zhì)量規(guī)格：>98,BR 人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanα-L-iduronidase,IDUAELISAKit 96T/48T

DL-天冬酰胺，一水  DL-Asparagine monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99% 大鼠內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1)試劑盒 Rat vascular cell adhesion protein 1,VCAM-1/CD106 ELISA kit
風(fēng)信子素 HPLC≥98% 20mg differeiation40ligand,sCD40LELISA試劑盒兔子可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蜂斗菜內(nèi)酯A HPLC≥98% 20mg DMDC處理試劑盒100

佛手柑內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg DMDC水500毫升

佛手柑素 HPLC≥98% 20mg DMEM/F12培養(yǎng)基1/10升(片劑)

佛司可林 HPLC≥98% 20mg DMEM培養(yǎng)基1/10升(片劑)

伏格列波糖 HPLC≥98% 20mg DMEM完全培養(yǎng)液(無(wú)抗生素)500毫升

扶桑甾醇 HPLC≥98% 10mg DMEM完全培養(yǎng)液500毫升

茯苓酸 HPLC≥98% 5mg DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基A高糖、谷氨酰胺、同酸B高糖、谷氨酰胺C高糖、同酸D低糖、谷氨酰胺、同酸E無(wú)酚紅500毫升

輔酶Q HPLC≥98% 20mg DNA標(biāo)準(zhǔn)樣(100至2000堿基)50

附子靈 HPLC≥98% 20mg DNA產(chǎn)物0酸化處理試劑盒10
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。