PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：庫蚊通用PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

兔趨化因子(rabbit Raes)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     5-Fluorouracil  中文名：  分子式：C4H3FN2O2 

兔素F2aelisa試劑盒   兔素F2a試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔素F2a試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔素F2a試劑盒、兔素F2a elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Aminoindazole  19335-11-6  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3 

兔素E2elisa試劑盒   兔素E2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔素E2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔素E2試劑盒、兔素E2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Aminofluorescein  中文名：5-氨基熒光素  分子式：C20H13NO5  度：98.0%

兔素E2(rabbit PGE2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Formyl-2-furylboronic acid  27329-70-0  中文名：  分子式：C5H5BO4 

兔素E1elisa試劑盒   兔素E1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔素E1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔素E1試劑盒、兔素E1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     5-Aminofluorescein  中文名：5-氨基熒光素  分子式：C20H13NO5
4,5-Di-O-caffeoylquinic acid methyl ester  中文名：4,5-二咖啡酰奎寧酸甲酯  分子式：C26H26O12  度：97.5%  兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體(ANGA)ELISAKit  

Methyl chlorogenate  中文名：綠原酸甲酯  分子式：C17H20O9  度：98.0%  兔子孕激素/孕(PROG)ELISAKit  

3,6'-Disinapoylsucrose  中文名：3,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19  度：98.0%  兔子膠原酶II(CollagenaseII)ELISAKit   

Triethyl   中文名：檸檬酸三乙酯  分子式：C12H20O7  度：98.0%  大鼠巨噬細(xì)胞蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISAKit              

α-Lipoic acid  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2  度：98.5%  兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1αelisa試劑盒   兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒、兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
庫蚊通用PCR檢測(cè)試劑盒說明書米爾貝肟  Milbemycin oxime  質(zhì)量規(guī)格：A3+A4>97% Mouseα-galactoyl,GalELISA試劑盒小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

伐地考昔  Valdecoxib  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒 ，英文名： Des ELISA Kit

胃膜素,胃粘蛋白,人胃泌素  Gastrin I,human   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠酸性0酸酶(PAP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatProstaticAcidPhosphatase,PAPELISAKit 96T/48T

UDPGA Na；尿苷-5'-二葡糖醛酸三鈉鹽  Uridine 5'-diphosphoglucuronic acid tri salt  質(zhì)量規(guī)格：≥98%；美國進(jìn)口 人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)試劑盒 human coicoopin releasing hormone,CRH ELISA Kit

替卡西林,替卡西林二鈉  Ticarcillin di salt  質(zhì)量規(guī)格：BR,二鈉鹽 RatSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

替卡西林(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ticarcillin di salt  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定，二鈉鹽 HRP反應(yīng)終止緩沖液100毫升

RGD肽  Arg-Gly-Asp   質(zhì)量規(guī)格：>97%,integrin抑制劑 Mouseα-Glucosidase,a-GluELISA試劑盒小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

肝素鋰  Heparin lithium  質(zhì)量規(guī)格：>150IU/MG,BR 小鼠接觸蛋白1(CN1)ELISA試劑盒 ，英文名： CN1 ELISA Kit

促胰液素;胰泌素  Secretin Acetate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人β甘露糖苷酶(βManase)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanβmannosidase,βManaseELISAKit 96T/48T

麝香草酚  Thymol  質(zhì)量規(guī)格：AR 大鼠緊張素原(aGT)試劑盒 Rat angiotensinogen,aGT ELISA Kit
反式玉米素  trans-Zeatin  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠舒緩激肽(BK)試劑盒 Rat bradykinin,BK ELISA Kit

氯亞鉑酸鉀   Dipotassium tetrachloroplatinate  質(zhì)量規(guī)格：BR,鉑含量 ≥46%,原始鉑粉度＞99.95%  大鼠性因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA檢測(cè)試劑盒RatvonWillebrandFactor,vWFELISAKit 96T/48T

環(huán)黃芪醇  Cycloastragenol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠性因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒 Rat von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit

馬兜鈴酸A  Aristolochic acid A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠性因子裂解酶(vWF-cp)試劑盒 Rat von Willebrand Factor cleaving protease,ADAMTS-13/vWF-cp ELISA Kit

羥基茜草素/紅紫素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Purpurin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠血紅蛋白(Hb)試劑盒 Rat Hemoglobin,Hb ELISA Kit

酸棗仁皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)  Jujuboside D  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠血紅蛋白(HbCO)試劑盒 Rat Carboxyhemoglobin,HbCO ELISA Kit

偽原薯蕷皂苷  Pseduoprotodioscin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠血紅素結(jié)合蛋白(HPX)試劑盒 Rat hemopexin,HPX ELISA Kit

氧化芍藥苷,羥基芍藥苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  Oxypaeoniflorin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA檢測(cè)試劑盒Rathemeoxygenase1,HO-1ELISAKit 96T/48T

3-異倒捻子素  3-isomangostin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠血紅素氧合酶1(HO-1)試劑盒 Rat heme oxygenase 1,HO-1 ELISA Kit

柚皮苷二氫查爾酮  Naringin dihydrochalcone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA檢測(cè)試劑盒Rathemeoxygenase2,HO-2ELISAKit 96T/48T
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。