PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：節(jié)片代凡PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒              5'-Deoxy-5-fluorocytidine  中文名：  分子式：C9H12FN3O4 

兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit     5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  24065-33-6  中文名：  分子式：C5H3ClO2S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔性因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISAKit     6-Hydroxyrubiadin  中文名：6-羥基甲基異茜草素  分子式：C15H10O5  度：97.5%

兔性因子(rabbit VWF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Chloro-2-nitrobenzoic acid  中文名：  分子式：C7H4ClNO4  度：98.0%

兔細(xì)胞粘附分子-1(rabbit VCAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile  147619-40-7  中文名：  分子式：C7H5ClN2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
Diethyl 2-acetamido-2-phenethylmalonate  中文名：  分子式：C17H23NO5  度：98.0%  兔子皮質(zhì)醇elisa試劑盒   兔子皮質(zhì)醇試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子皮質(zhì)醇試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子皮質(zhì)醇試劑盒、兔子皮質(zhì)醇elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Diethyl 2-acetamido-2-(4-octylphenethyl)malonate  中文名：  分子式：C25H39NO5  度：98.0%  兔子腦素elisa試劑盒   兔子腦素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子腦素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子腦素試劑盒、兔子腦素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Tropisetron hydrochloride  中文名：鹽酸托烷司瓊  分子式：C17H21ClN2O2  度：98.0%  兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒  

Tricetyl fingolimod  中文名：  分子式：C25H39NO5  度：98.0%  兔子素E2(PGE2)ELISA試劑盒  

Fingolimod hydrochloride  中文名：鹽酸芬戈莫德  分子式：C19H34ClNO2  度：98.0%  兔子素E1(PGE1)ELISA試劑盒
節(jié)片代凡PCR檢測(cè)試劑盒說明書D-α-氨基己二酸  D-a-Aminoadipic acid  質(zhì)量規(guī)格：0.97 英文名稱RatinducibleniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)規(guī)格：96T/48T

D-高苯丙氨酸  D-Homophenylalanine  質(zhì)量規(guī)格：>90%(T),BR 高效液相色譜(HPLC)分析20樣本

D-焦谷氨酸  D-Pyroglutamic acid  質(zhì)量規(guī)格：0.98 ELISAKitOSM人抑瘤素M規(guī)格：48T/96T

D-環(huán)丙基丙氨酸  D-Cyclopropylalanine  質(zhì)量規(guī)格：BR 小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒 ，英文名： M-CSF ELISA Kit

D-叔亮氨酸鹽酸鹽  D-tert-Leucine hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：BR，98.5% 大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA檢測(cè)試劑盒RatAquaporin5,AQP-5ELISAKit 96T/48T

D-正纈氨酸  D-Norvaline  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人催產(chǎn)素(OT)試劑盒 Human oxytocin,OT ELISA Kit

D-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽  H-D-Phe-OMe·HCl  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR Raetinol-bindingprotein,RBPELISAKit大鼠視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-乙酰-D-谷氨酸  Ac-D-Glu-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Hollande固著液50毫升

CBZ-D-亮氨酸  Z-D-Leu-OH   質(zhì)量規(guī)格：BR,>98%,油狀 MouseVitaminB6,VB6ELISA試劑盒小鼠維生素B6(VB6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

D-別異亮氨酸  D-allo-Isoleucine   質(zhì)量規(guī)格：0.98 小鼠巨嗜細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit
佛司可林(標(biāo)準(zhǔn)品)  Forskolin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠激素釋放激素(GH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

黃藤素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Palmatine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠激素釋放激素(GH)ELISA試劑盒 ，英文名： GH ELISA Kit

鹽酸西那卡塞；鹽酸甲狀旁腺激素  Cinacalcet HCl,AMG073  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠素釋放素受體(GHR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

黃藤素  Palmatine  質(zhì)量規(guī)格：≥97%,BR 小鼠促胰液素(SCT)ELISA試劑盒 ，英文名： SCT ELISA Kit

鏈霉蛋白酶/鏈絲菌蛋白酶/鏈霉菌蛋白酶  Pronase E  質(zhì)量規(guī)格：BR，4000u/mg,進(jìn)分 小鼠促有絲分裂因子(MF/MPF)ELISA試劑盒 ，英文名： MF/MPF ELISA Kit

抗蛋白酶(進(jìn)口)  Antipain dihydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 小鼠簇集蛋白(CLU)ELISA試劑盒 ，英文名： CLU ELISA Kit

D-巖藻糖  D-(+)-FUCOSE  質(zhì)量規(guī)格：>98%,日本進(jìn)口原裝 小鼠催產(chǎn)素(OT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

N-乙酰-DL-絲氨酸  N-Acetyl-DL-Serine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠催產(chǎn)素(OT)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseoxytocin,OTELISAKit 96T/48T

玉米素  Zeatin  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠催產(chǎn)素(OT)ELISA試劑盒 ，英文名： OT ELISA Kit

水飛薊素  Silymarin  質(zhì)量規(guī)格：水飛薊素UV 80%；單賓30% 小鼠催乳素(PRL)ELISA試劑盒 ，英文名： PRL ELISA Kit
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。