PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：布魯塞爾德克酵母PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISAKit     Adrenosterone  382-45-6  中文名：腎上腺甾酮  分子式：C19H24O3 

兔血清淀粉樣蛋白Aelisa試劑盒   兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒、兔血清淀粉樣蛋白A elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     7-Acetoxy-4-methylcoumarin  中文名：7-乙酰氧基-4-甲基香豆素  分子式：C12H10O4 

兔血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISAKit     5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine  29927-08-0  中文名：5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺  分子式：C9H10N2S 

兔血清(NO)ELISA試劑盒     5'-Deoxy-5-fluorocytidine  中文名：  分子式：C9H12FN3O4  度：99.0%

兔血凝素樣氧化受體1   英文名稱：   Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LOX-1  5'-Deoxy-5-fluorocytidine  66335-38-4  中文名：  分子式：C9H12FN3O4  度：99.0%
n-Octylbenzene  中文名：  分子式：C14H22  度：98.0%  豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2elisa試劑盒   豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2試劑盒、豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

1-Indanamine hydrochloride  中文名：  分子式：C9H12ClN  度：98.0%  小鼠膽堿0酸甘油酯elisa試劑盒   小鼠膽堿0酸甘油酯試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠膽堿0酸甘油酯試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠膽堿0酸甘油酯試劑盒、小鼠膽堿0酸甘油酯elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Rasagiline mesylate  中文名：甲磺酸雷沙吉蘭  分子式：3S  度：98.0%  豚鼠白介素1受體拮抗劑elisa試劑盒   豚鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豚鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒、豚鼠白介素1受體拮抗劑elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

4-Amino-3,5-dichloropyridine  中文名：  分子式：C5H4Cl2N2  度：98.0%  兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白elisa試劑盒   兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒、兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Roflumilast  中文名：羅氟司特  分子式：C17H14Cl2F2N2O3  度：98.0%  兔子皮質(zhì)elisa試劑盒   兔子皮質(zhì)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子皮質(zhì)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子皮質(zhì)試劑盒、兔子皮質(zhì)elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
布魯塞爾德克酵母PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)頭孢硫脒；先鋒霉素18號(hào)  Cefathiamidine  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR ELISAKitAP人抑肽酶規(guī)格：48T/96T

D-絲氨酸  H-D-Ser-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒 ，英文名： MDC/CCL22 ELISA Kit

D-絲氨酸甲酯鹽酸鹽  D-Serine methyl ester hydrochloride   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA檢測(cè)試劑盒RatAquaporin4,AQP-4ELISAKit 96T/48T

D-蘇氨酸  H-D-Thr-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人催產(chǎn)素受體(OX)試劑盒 Human OX ELISA Kit

D-色氨酸甲酯鹽酸鹽  D-Tryptophan methyl ester hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：0.98 Raetinolbindingprotein4,RBP-4ELISAKit大鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-乙酰-D-色氨酸  N-Acetyl-D-tryptophan   質(zhì)量規(guī)格：0.98 HOECHST33342和PROPIDIUMIODIDE細(xì)胞膜變檢測(cè)試劑盒50

D-酪氨酸甲酯鹽酸鹽  H-D-Tyr-OMe·HCl  質(zhì)量規(guī)格：0.99 MouseVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISA試劑盒小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2'-甲氧基腺;2'-O-甲基腺苷  2'-O-Methyladenosine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF)ELISA試劑盒 ，英文名： MCSF ELISA Kit

D-纈氨酸  D-Valine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 96T/48T

2'-脫氧鳥苷-3'-單二鈉  2'-Deoxy-3'-guanylic acid di salt  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠生成素2(ANG-2)試劑盒 Rat Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit
弗羅利辛 HPLC≥98% 20mg MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein6,IGFBP-6ELISA試劑盒小鼠樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

毛冬青皂苷甲 HPLC≥90% 20mg MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein6,IGFBP-6ELISA試劑盒小鼠樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

冬青素A, HPLC≥98% 20mg MouseIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISA試劑盒小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

車葉草苷酸 HPLC≥98% 10mg Mouseisletcellaibody,ICAELISA試劑盒小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

曲札茋苷 HPLC≥98% 20mg Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISA試劑盒小鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去氧土大黃苷；甲基虎杖苷 HPLC≥98% 20mg Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISA試劑盒小鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

密力特苷 HPLC≥98% 5mg Mousekeyholelimpethemocyanin,KLHELISA試劑盒小鼠鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白(KLH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

靈芝酸C HPLC≥98% 10mg MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISA試劑盒小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

苦參酮 HPLC≥98% 2mg MouseLactateDehydrogenase,LDHELISA試劑盒小鼠乳酸脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

異苦參酮 HPLC≥98% 2mg MouseLactoferrin,LTF/LFELISA試劑盒小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。