PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：糞腸球菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

恒河猴腎細胞;RM-3 人卵巢透明細胞癌細胞，ES-2細胞 ZR-75-30(癌細胞)乙酸纖維素薄膜1 O.D.

人細胞;LNCaP2--1,3-二甲基咪... 2-Chloro-4,5-dihydro-1,3-dimethyl... 101385-69-7 1G 通用試劑

ULBP1 Others Human 人 ULBP1 / RAET1 / N2DL1 人細胞裂解液 (陽性對照) L-2-安基丁醋 L-2-cMinobutyric ccid;L-2-cMino-n-butyric ccid;Butyrinq 292-23-8

恒河猴皮膚細胞;RM-S1N-(2-乙酰基)-亞基二乙酸二鈉鹽30/100ul/支

AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B2/A2) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 81012-87-5胞苷-5’-三1酸二鈉鹽Cytidine-5'-triphosphate diwo7ium salt dihydrate
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr異佛手柑內(nèi)酯Isobergapten質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

RGMA Others Human 人 RGMA 人細胞裂解液 (陽性對照) 異甘草苷（標準品）Isoliquiritin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

A375 人惡性色素瘤細胞雷馬曲班Ramatroban;BAY u3405質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

C6-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)大鼠腦細胞 C6-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) of rat brain glioma cells DMEM+10% FBS+2ug/ml puromycin異鉤藤堿(標準品)Isorhynchophylline質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

RSPO2 Protein Human 重組人 FTLS / RSPO2 蛋白 (186 Leu/Pro, Fc 標簽)異葒草苷(標準品)luteolin-6-C-glucoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
糞腸球菌PCR檢測試劑盒說明書人間充質(zhì)干細胞-肝臟裂解物HMSC-hp L超細高嶺土(6000(3.5um))Kaolin(superfine)質(zhì)量規(guī)格：6000(3.5um)

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 高嶺土(醫(yī)藥級)Kaolin質(zhì)量規(guī)格：醫(yī)藥級

正常小鼠Leydig細胞;TM3硅藻土G(TLC專用)Kieselguhr G質(zhì)量規(guī)格：TLC專用

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL硅膠(AR)Silica gel質(zhì)量規(guī)格：AR

EC109，人細胞 Human二氧化硅(99.99%,1-3mm)Silicon dioxide質(zhì)量規(guī)格：99.99%,1-3mm
NCI-H23細胞，人非小細胞細胞 小鼠成纖維細胞,3T3NIH細胞 CM-R087大鼠軟骨細胞完全培養(yǎng)基100mL5-扶乳清酸shēng huà shì jì容量：500毫克

RKO(人腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2水解酪蛋柏瓊脂; M-H瓊脂 Ccsqin xy7nolysctq cgcr; Muqllqr-Hinton cgcr;

Gibco 17005042 Keratinocyte-SFM (1X), Liquid(10724-011和37000015) 500ml尿嘧啶 Uracil (≥99%, cell culture tested) 66-22-8 25G 核酸衍生物

人腎系膜細胞cDNAHRMC cDNA2′-脫氧胞苷-5′-單嶙酸shēng huà shì jì容量：RT25克

CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人細胞裂解液 (陽性對照) Foline-pxenol 50ml/100ml/250ml Sigma F9252
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。