【產品名稱】: 內阿米巴通用PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Entamoeba spp. PCR
【貨號】: BKP3618

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

內阿米巴通用PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

EB病毒轉化的人B細胞;KMYBAcriflavinexy7nochloride鹽酸黃25克BR，99%

REG1B Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1B / PSPS2 人細胞裂解液 (陽性對照) 三拂磺醋銅 COPPqR(II) TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 34946-8-

CM-H066人腎實質細胞完全培養基100mLwo7iumbutyrate正鈉1公斤CP，98%

CACO-2細胞，人細胞 人細胞,RPMI-8226細胞 人胚腎細胞;293 [HEK-293]OCTYL-B-D-GLUCOPYRANOSIDE辛基-β-D-葡萄糖苷蛋白組學級500MG29836-26-8

F9(小鼠) 5×106cells/瓶×2AlbuminEgg 1g/5g/25g原裝 Sigma A5378
中國倉鼠卵巢細胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF 肥大細胞瘤細胞，P815細胞 INS-1細胞，大鼠細胞去甲基雷諾嗪Desmethyl Ranolazine質量規格：美國進口

293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP雷諾嗪-d3Ranolazine-d3質量規格：美國進口

STIM1 Others Human 人 STIM1 / GOK 人細胞裂解液 (陽性對照) 雷諾嗪Ranolazine質量規格：美國進口

神經元細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)去甲基雷諾嗪β-D-葡萄糖苷酸Desmethyl Ranolazine β-D-Glucuronide質量規格：美國進口

EPHB1 Others Human 人 EPHB1 / EPHT2 人細胞裂解液 (陽性對照) (R)-鹽酸樂卡地平(R)-Lercanidipine Hydrochloride質量規格：美國進口
恒河猴皮膚細胞;RM-S1 人細胞，LoVo細胞 TE-1(細胞)3,5-二甲氧基芐溴(>96.0%(GC))3,5-Dimethoxybenzyl Bromide質量規格：>96.0%(GC)

人癌細胞;MCF 7B3,5-二溴-1-三甲基硅基苯(>97.0%(GC))3,5-Dibromo-1-trimethylsilylbenzene質量規格：>97.0%(GC)

CD200R4 Others Mouse 小鼠 CD200R4 / CD200 Receptor 4 / CD200RLa 人細胞裂解液 (陽性對照) 3,5-二水楊酸鋰(>98%，BC)Lithium 3,5-diiodosalicylate質量規格：>98%，BC

恒河猴腎細胞;RM-1無水溴化鋰(>98%,BR)Lithium bromide質量規格：>98%,BR

AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B2/A1) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 偏1酸鋰(>98%,BR)Lithium metaphosphate質量規格：>98%,BR
內阿米巴通用PCR檢測試劑盒說明書CL-0311293E(人胚腎細胞(EBNA1基因修飾))5×106cells/瓶×24-叔丁基磺酰杯[4]芳烴(>98.0%(HPLC))質量規格：>98.0%(HPLC)4-tert-Butylsulfonylcalix[4]arene

SHZ-88細胞，癌細胞 人肥大細胞細胞,CHMAS細胞 EB病毒轉化的人B細胞;KMY10364-磺酸基硫雜[4]芳烴鈉鹽(>98.0%(HPLC))質量規格：>98.0%(HPLC)4-Sulfothiacalix[4]arene  Salt

22RV1(人細胞) 5×106cells/瓶×22,11-二硫雜[3.3]對環芳烷(>97.0%(HPLC))質量規格：>97.0%(HPLC)2,11-Dithia[3.3]paracyclophane

PVR Others Mouse 小鼠 CD155 / PVR 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,6,20,25-四氮雜[6.1.6.1]對環芳烷(>98.0%(HPLC))質量規格：>98.0%(HPLC)1,6,20,25-Tetraaza[6.1.6.1]paracyclophane

人羊膜上皮細胞裂解物HAmEpiCL4-羥基左旋咪唑質量規格：美國進口4-Hydroxy Levamisole
PCR檢測試劑盒

內阿米巴通用PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。