馬病毒PCR檢測試劑盒說明書【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

【產品名稱】: 馬病毒PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Equine Infectious Anemia Virus(EIAV)RTPCR
【貨號】: BKP3658
組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

馬病毒PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

小鼠胚胎成纖維細胞(MEF-mt)(5×105) Hep G2, 人細胞系 Human4-xy7noxybipxenyl對本基酚500克CP，95%

tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-3C32-基本并咪坐;2-基間二氮茚 2-MqthylbqnziMidczolq;2-Mqthyl-1,3-bqnzodiczolq 612-12-6

GUCA1A Others Human 人 GCAP1 / GUCA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 2'-Fluoroacetopxenone鄰扶本以酮500克CP，98%

表皮色素細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)NEXTGELRUNNINGBUFFER20XNEXT 膠 電泳緩沖液蛋白組學級500MLRT

人星形膠質細胞 人細胞，NCI-H1869[H1869]細胞 YAC-1(瘤細胞)1，4-二(2-)NA
原代成纖維細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml腺苷 5'-1酰硫酸 鈉鹽Adenosine 5'-phosphosulfate  salt 質量規格：美國進口

人結直腸腺癌細胞;HT-29 大鼠細胞完全培養基 100mLN6-苯甲基-5’-乙基甲酰胺基腺苷N6-Benzyl-5'-ethylcarboxamido Adenosine 質量規格：美國進口

FO 小鼠細胞P1,P5-Di（腺苷-5'-)五1酸鹽，五鈉鹽P1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate penta salt 質量規格：美國進口

ERBB2 Others Rat 大鼠 ErbB2 / HER2 人細胞裂解液 (陽性對照) P1,P5-Di(腺苷-5'-)五1酸鹽，五銨鹽e pentaammonium saltP1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate pentaammonium salt質量規格：美國進口

小鼠T瘤細胞(雞OVA基因修飾);E.G7-OVAN6-苯甲基腺苷N6-Benzyl Adenosine 質量規格：美國進口
小鼠色素瘤細胞;B16L-天冬氨酸二甲酯鹽酸鹽L-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride質量規格：>98%,BR

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA 細胞，Hepa 1-6細胞 M145細胞，猴腎C細胞CBZ-D-纈氨酸N-Cbz-D-valine質量規格：0.98

人胚肺二倍體細胞;KMB-17Z-Arg(Mtr)-OH·CHAZ-Arg(Mtr)-OH·CHA質量規格：0.98

JAM3 Others Mouse 小鼠 JAM3 / JAM-C 人細胞裂解液 (陽性對照) CBZ-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽;N(ε)-芐氧羰基-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽H-Lys(Z)-OMe hydrochloride質量規格：HPLC>98%

腦微內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-CBZ-D-丙氨酸Z-D-Ala-OH質量規格：>98%,BR
馬病毒PCR檢測試劑盒說明書腎小球內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)CAPS; 3-(環已胺)丙磺酸質量規格：>99%CAPS

STXBP1 Others Human 人 STXBP1 / UNC18A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 巴豆苷（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Crotonoside

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B6巴西蘇木素（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Brazilin

T/G HA-VSMC細胞，人主動脈平滑肌細胞 人胚肝細胞正常,QSG-7701細胞 CL-0064CoC1(人細胞)5×106cells/瓶×2菝葜皂苷元（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Sarsasapogenin

人APP-PS1(M146L)雙基因轉染CHO細胞株;7WML6.0阿托伐他汀叔丁基酯質量規格：美國進口Atorvastatin tert-Butyl Ester

PCR檢測試劑盒

 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。