大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒說明書【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

【產品名稱】: 大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Escherichia coliPCR
【貨號】: BKP3670
組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

QBC-939, 人細胞 (瘤株),Ke-3細胞 HL-60(急性粒細胞細胞)Estradiolβ-雌二醇100克CP，99%

小鼠細胞;Sp2/0-Ag1417-羥基 sprengerin... Hydroxy Sprengerinin C, 17 (HPLC,≥98%) 1029017-75-1 10MG 標準品

FLT3 Others Human 人 FLT3 / FLK2 / CD135 人細胞裂解液 (陽性對照) 5-拂-2’-脫氧脲核苷 Floxuridinq 20-91-9

大鼠腎小球系膜細胞;HBZY-1寶石紅蛋白染色試劑，英文名或英文縮寫：SYPRO red protein stain，級別：高，95%，規格：500克

人成纖維細胞( HCF) ( 5×105 )9032-75-1果膠酶(+4℃)Pectinase
微內皮細胞cDNAHCMEC cDNA溴化膽,從牛脂來(>98.0%(T))Cholesteryl Bromide from Beef Fat質量規格：>98.0%(T)

SLPI Others Human 人 SLPI 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 膽壬酸酯(>89.0%(GC))Cholesterol Pelargonate質量規格：>89.0%(GC)

大鼠小腸隱窩上皮細胞;IEC-6膽壬基碳酸酯Cholesterol Nonyl Carbonate質量規格：

95-D細胞，高轉移細胞 人細胞,M2e細胞 正常大鼠腎細胞;NRK膽庚基碳酸酯Cholesterol Heptyl Carbonate質量規格：

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2膽油醇碳酸酯(>70.0%(HPLC))Cholesterol Oleyl Carbonate質量規格：>70.0%(HPLC)
人導管瘤細胞;BT-4742,2'-二羥基偶氮苯(>98.0%(T))2,2'-Dihydroxyazobenzene質量規格：>98.0%(T)

PDPN Others Mouse 小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) S-乙酰半胱氨酸鹽酸S-Acetamidomethyl-L-cysteine hydrochloride質量規格：>98%,BR

CM-R022大鼠甲狀腺上皮細胞完全培養基100mLO-叔丁基-L-蘇氨酸甲酯鹽酸鹽O-tert-Butyl-L-threonine methyl ester hydrochloride質量規格：0.98

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞細胞 牛腎細胞,MDBK細胞 Hs 578Bst(人成纖維細胞)L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽L-Alanine isopropyl ester hydrochloride質量規格：>98%

小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-1L-天冬酰胺甲酯鹽酸鹽Methyl L-asparaginate monohydrochloride質量規格：0.98
大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒說明書人癌細胞;MDA-MB-468Flurprimidol2-甲基-1-嘧啶-5-基-1-(4-三扶甲氧基本基)丙-1-醇1KU高，98%

TF Others Human 人 ansferrin / TF 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-溴-3-基-2- 3,3-Dimqthylcllyl bromidq 870-63-3

牛腦垂體提取物BPEEDACoHC11-乙基-(3-二甲基基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽100毫克高，99%

GAP43 Others Human 人 GAP43 / Neuromodulin 人細胞裂解液 (陽性對照) 羥基乙酸shēng huà shì jì容量：100毫克

CHL-Don 中國倉鼠肺成纖維樣細胞(-N，N-雙

PCR檢測試劑盒

 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。