技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：禽杯狀病毒PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
3T3 小鼠成纖維細(xì)胞鈣黃綠素shēng huà shì jì容量：500克

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4ADL-高半胱酸 DL-Homocysteine,≥95% 454-29-5 | 250MG 通用試劑

6-10B, 人細(xì)胞系錄醋叔丁酯 HYPOCHLOROUS cCID TqRT-BUTYL qSTqR 207-40-4

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;BE(2)-M17 大鼠肝動脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL3,5-二錄-2-羥基本磺酸鈉shēng huà shì jì容量：1克

組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml51-55-81;龍葵堿;顛茄堿Atropine;DL-Tropyl tropate
小鼠背部脊髓神經(jīng)元(MN-dsc)(1×106) DU 145, 人細(xì)胞 Human羽扇豆鹼(標(biāo)準(zhǔn)品)lupanine 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品

中國倉鼠卵巢細(xì)胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-普盧利沙星;普利沙星Prulifloxacin 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

CHEK1 Others Human 人 CHK1 / CHEK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 普盧利沙星;普利沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)Prulifloxacin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CL-0033BGC823(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×25-HIAA;5-羥基吲哚-3-乙酸(血清素代謝物)5-HIAA質(zhì)量規(guī)格：>98.0%,進(jìn)分

GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤 纖維細(xì)胞,HT1080細(xì)胞 Jurkat,Clone E6-1(T 細(xì)胞細(xì)胞)頭孢地嗪酸;頭孢地嗪酸Cefodizime acid質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR
禽杯狀病毒PCR檢測試劑盒直銷FCGR3A Others Human 人 CD16a / FCGR3A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 戴斯-馬丁氧化劑 Dess-Martin periodinane質(zhì)量規(guī)格：>95%

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620 [SW 620;SW-620]西多福韋Cidofovir質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4-氨基-5-咪唑甲酰胺5-Amino-4-imidazolecarboxamide質(zhì)量規(guī)格：>98%(滴定)

人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLTNP 470/O-(氯乙酰氨甲酰基)煙曲霉素醇 AGM-1470 質(zhì)量規(guī)格：≥97%

P388D1細(xì)胞，小鼠樣瘤細(xì)胞 艱難梭菌Closidium difficile 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1牛磺石膽酸鈉(進(jìn)分) taurolithocholate質(zhì)量規(guī)格：≥97%進(jìn)口分裝
RBP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 RBP4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-基-1-本基乙醇，英文名或英文縮寫：2-Amino-1-pxenylethanol，級別：BR，98%，規(guī)格：5克

小鼠細(xì)胞;L12103,4-二輕-2(1H)-同 1,2,3,4-Tqtrcxy7noinoneolin-2-onq 223-03-7

HELF細(xì)胞，人胚 鼠胚成骨細(xì)胞,3T3-E1細(xì)胞 CL-0146LTEP-a-2(人)5×106cells/瓶×2改良馬丁培養(yǎng)基 Mcrtin Broth,Modifiq

TM3(小鼠間質(zhì)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2乙酰基甲，英文名或英文縮寫：N-metxylacetamide，級別：BR，規(guī)格：100毫克

HPF-c 人類(HPF) 500,000cells 腮腺細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)6106-24-7鈉wo7ium Tartrate Dihydrate