技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：口蹄疫病毒2亞型PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;C3H 10T1/2 2A6 小鼠腮腺細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLwo7iumxy7noXIDEPELLETSACS級(jí),美國(guó)國(guó)家處方級(jí),食品化學(xué)法典級(jí)小球RT不sigma

小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) Mouse三拂-1-(2-呋基)-1，3-丁二同 4,4,4-TRIFLUORO-1-(2-FURYL)-1,3-BUTcNqDIONq 36-90-9

FOLR1 Others Human 人 FOLR1 / Folate receptor alpha 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基5毫升2～8℃

艾氏腹水瘤瘤株;EhrlichL-CYSTEINExy7noCHLORIDE,ANxy7noUSL-半胱酸鹽酸鹽,無(wú)水*100G52-89-1RT

TNFRSF18 Others Rat 大鼠 GI / TNFRSF18 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 20XSSC溶液 100ml Sigma分裝
小鼠單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞;RAW 264.7 [RAW264.7頭孢羥氨芐 CEFADROXIL質(zhì)量規(guī)格：>950μg/mg,BR

ERBB3 Others Rhesus 恒河猴 HER3 / ErbB3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) D-泛酸鈉 D-pantothenate 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CFPAC-1 人細(xì)胞依度沙班;伊多塞班Edoxaban質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

SW 1990人細(xì)胞系 1990 human pancreatic cancer cell line SW L-15+10%FBS牛防風(fēng)素;6-甲氧基當(dāng)歸素Sphondin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%

CD40LG Protein Canine 重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白6-羥基(標(biāo)準(zhǔn)品)6-Hydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格：>98%(GC),標(biāo)準(zhǔn)品
口蹄疫病毒2亞型PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)牛腎細(xì)胞;MDBK(NBL-1)DL-叔亮氨酸DL-tert-Leucine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

PDGFRA Others Rat 大鼠 PDGFRa / CD140a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DL-賴氨酸DL-Lysine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CL-0173NRK(大鼠腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2DL-精氨酸鹽酸鹽DL-Arginine Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

HepG2細(xì)胞， 人T瘤細(xì)胞系,Hut-102細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3左旋肉堿；維生素BT；左卡尼汀L(-)-Carnitine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ACHN(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2左卡尼汀;左旋肉堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Levocarnitine;L(-)-Carnitine質(zhì)量規(guī)格：HPLC含量測(cè)定
人食道平滑肌細(xì)胞 (HESMC)( 5×105 ) RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元 Rattus鹽酸脫氧土霉素，英文名或英文縮寫(xiě)：Doxycycline HCl，級(jí)別：15000～150000,液體,7條帶，規(guī)格：100毫克

牛腎細(xì)胞;MDBK(NBL-1)3,3,5-三基環(huán)(順?lè)椿旌衔?/span>) 3,3,5-Trimqthylcyclohqxcnol 116-0-9

PDGFRA Others Rat 大鼠 PDGFRa / CD140a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) ACRYLAMIDE酰胺蛋白組學(xué)級(jí)白色結(jié)晶RTsigma

CL-0173NRK(大鼠腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2阿糖腺嘌吟，英文名或英文縮寫(xiě)：Ara-A，級(jí)別：超，98%，規(guī)格：1克

HepG2細(xì)胞， 人T瘤細(xì)胞系,Hut-102細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3673-06-3D-本;D-2-基-3-本基;D-α-基-β-本;D-α-基氫化肉桂酸D-pxenylalanine;D-α-AMino-β-pxenylpropionic acid;(R)-(+)-pxenylalanine;(R)-2-AMino-3-pxenylpropionic acid;D-β-pxenylalanine