本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
【產品名稱】: 草魚呼腸孤病毒2型PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Grass carp reovirus(GCRV)2RTPCR
【貨號】: BKP3742
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

草魚呼腸孤病毒2型PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

NCI-H209(人小細胞細胞) 5×106cells/瓶×2 MRC-5(胚肺細胞)移液器P5000shēng huà shì jì容量：RT，避光100克

MLF, 小鼠成纖維細胞5-錄水楊醋;5-錄-2-羌基本加醋 5-Chlorosclicylic ccid;5-Chloro-2-xy7noxybqnzoic ccid 31-14-

USP7 Others Human 人 USP7 / HAUSP (aa 208-560) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸丫啶shēng huà shì jì容量：2～8℃250克

人胚胎胰腺組織來源細胞;CCC-HPE-2AmberliteXAD761離子交換大孔吸附樹脂1克

J-1111細胞，單核細胞 人細胞,NCI-H1650細胞 CL-0436SF17(人細胞)5×106cells/瓶×2(5’-1酸吡哆醛)
人細胞;PANC-1溴-6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)Magenta-Gal質量規格：>98%,BR

P815細胞，肥大細胞瘤細胞 人順鉑耐藥株,SGC7901/DDP細胞 非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2檸檬酸鎂九水(>98%,BR)Magnesium  nonahydrate質量規格：>98%,BR

大鼠細胞;MMQ十二烷基硫酸鎂(分子生物學)Magnesium dodecyl sulfate質量規格：>85%,分子生物學級

RK2 Others Human 人 RK2 / k-B / KB 人細胞裂解液 (陽性對照) 氟化鎂(>98%,BR)Magnesium fluoride質量規格：>98%,BR

髓核細胞培養基NPCM-prf氫氧化鎂(>99%,BR)Magnesium hydroxide質量規格：>99%,BR
草魚呼腸孤病毒2型PCR檢測試劑盒說明書人細胞;HOSDMT保護性-2'-甲氧基尿苷DMT-2'-OMe-U質量規格：>98%,BR

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12 [PC12] T細胞細胞，HuT78細胞 Mv.1.Lu(NBL-7)細胞，貂肺上皮細胞5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rC5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rC質量規格：>98%,BR

SKOV3 [SK-OV-3], 人腺癌細胞系 Human5’-DMT-2’-TBDMS-rU5’-DMT-2’-TBDMS-rU質量規格：>98%,BR

LCN1 Others Human 人 LCN1 / VEGP / Lipocalin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 5’-DMT-2’-TBDMS-iBu-rG5’-DMT-2’-TBDMS-iBu-rG質量規格：>98%,BR

組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml5’-DMT-2’-TBDMS-Ac-rC5’-DMT-2’-TBDMS-Ac-rC質量規格：>98%,BR
人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2羧甲淀粉鈉shēng huà shì jì容量：5克

CLEC6A Others Human 人 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 酸激酶 Pyruvate Kinase from rabbit muscle 9001-59-6 1KU 通用試劑

C57BL/6小鼠骨髓間質干細胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cells衣康醋;亞基琥珀醋;2-亞基丁二醋;分解屋頭醋 Itcconic ccid;Propylqnqdiccrboxylic ccid 97-62-4

HSC1細胞，人色素瘤細胞 羅伊氏乳桿菌 人B細胞瘤細胞;RAMOS(RA.1)3，5-二甲基-3-5克

WPMY-1(人正常基質永生化細胞) 5×106cells/瓶×21121-60-42-;-2-; 2-; 2-醛基2-Pyridinecarboxaldehyde;Pyridine-2-aldehyde; Picolinaldehyde; 2-Pyridyla dehyde; 2-Pyridinecarbaldehyde;

PCR檢測試劑盒：

草魚呼腸孤病毒2型PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。