技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：鏈球菌組PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;HH-01 人腦內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLDSCN,N'-琥珀基碳酸酯10克高，98.5%

大鼠氣管上皮細(xì)胞;RTE花生醋;正二十醋 crcchidic ccid;crcchic ccid;n-qicoscnoic ccid;qicosoic ccid 206-30-9

CD36 Others Rat 大鼠 CD36 / SCARB3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 5-AMP瓊脂糖凝膠4Bshēng huà shì jì容量：30U

腸粘膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)5′-UTP,3Na尿苷-5′-三嶙酸三鈉鹽1000UBR，99%

HASMC細(xì)胞，人大動脈平滑肌細(xì)胞 小鼠自發(fā)高癌細(xì)胞,TA2細(xì)胞 人虹膜色素上皮細(xì)胞cDNAHIPEpiC cDNAGDX　102(聚二本多孔小球)NA
人腎小管上皮細(xì)胞;HKC通關(guān)藤苷H（標(biāo)準(zhǔn)品）Tenacissoside H質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

NCI-H345細(xì)胞，人小細(xì)胞細(xì)胞 小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞,Neuro-2a細(xì)胞 CM-H119人腦膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL葫蘆素E（標(biāo)準(zhǔn)品）Cucurbitacin E質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%，標(biāo)準(zhǔn)品

PA317(小鼠成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鉤吻素子（標(biāo)準(zhǔn)品）Koumine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Promocell C-27439 Adipocyte Nuition Medium KIT, 脂肪細(xì)胞營養(yǎng)培養(yǎng)基套裝 500ml鉤吻素甲（標(biāo)準(zhǔn)品）Gelsemine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠源細(xì)胞原B1（標(biāo)準(zhǔn)品）Procyanidin B1質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%，標(biāo)準(zhǔn)品
鏈球菌組PCR檢測試劑盒直銷倉鼠卵巢細(xì)胞;Lec1N-乙酰-DL-丙氨酸N-Acetyl-DL-Alanine質(zhì)量規(guī)格：0.98

BEL-7405細(xì)胞，細(xì)胞 細(xì)胞,BI U-87細(xì)胞 615小鼠樹突狀細(xì)胞瘤株;DCSOSI-420，游離堿（去甲埃羅替尼）OSI-420, Free Base (Desmethyl Erlotinib)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);LA1-GFP非那雄胺 2-(2-甲基丙醇）酰胺Finasteride 2-(2-Methylpropanol)amide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CD274 Others Mouse 小鼠 B7-H1 / CD274 / PD-L1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 6α-羥基非那雄胺6α-Hydroxy Finasteride質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人腸微內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HIMECL非那雄胺羧酸Finasteride Carboxylic Acid質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
U251(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2對胺100克

HUF-c 人類子宮成纖維細(xì)胞(HUF) 500,000cells 腎上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2,3-二錄本加醋 2,3-Dichlorobqnzoic ccid 20-42-3

卵巢成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)癸酸500毫克

FCGR2A Others Cynomolgus 食蟹猴 CD32a / FCGR2A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 遠(yuǎn)藤氏瓊脂培養(yǎng)基250克RT

MIN6 小鼠瘤細(xì)胞4595-60-22-溴嘧啶2-Bromopyrimidine