PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：44，同人病毒4型PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

肺動脈成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-山梨醇shēng huà shì jì容量：25克

Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 (aa 1-725) 人細胞裂解液 (陽性對照) 言醋-4，4-聯(lián) 4,4'-DIPYRIDYL DIxy7noCHLORIDq 796-7-3

人結(jié)直腸腺癌細胞;Caco-2DL-2-基shēng huà shì jì容量：1公斤

293T細胞，SV40永生化的人胚腎上皮細胞 蚊子細胞,C6/36細胞 CL-0250801-D (人巨細胞性細胞)5×106cells/瓶×2三嶙酸脫氧核糖核苷酸shēng huà shì jì容量：RT50克

ZR-75-1(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2613-45-62.4-二甲氧基2,4-Dimetxoxy
U-937細胞，組織細胞瘤細胞 低分化細胞系,SUNE-1細胞 CL-03142V6.11(人胚腎細胞)5×106cells/瓶×2鹽酸雙環(huán)胺（標準品）DICYCLOMINE HYDROCHLORIDE質(zhì)量規(guī)格：供TCL鑒別用

敘利亞倉鼠細胞系;Syrian Hamster AV12氯解1定（標準品）2-Pyridinealdoxime methochloride質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定

MBL1 Others Mouse 小鼠 MBL1 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸賽庚啶（標準品）CYPROHEPTADINE HYDROCHLORIDE質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定

原代系膜細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml（標準品）Amidopyrine/aminopyrine質(zhì)量規(guī)格：含量測定

CDK16 Others Human 人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 沙利度胺（標準品）Thalidomide質(zhì)量規(guī)格：含量測定
44，同人病毒4型PCR檢測試劑盒供應C2C12, 小鼠肌原細胞 人細胞，DU145細胞 SK-MES-1(人細胞)白楊素(標準品）Chrysin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,分析標準品

人肺巨細胞癌低轉(zhuǎn)移細胞株;PG-LH7白楊素Chrysin質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CPM Others Human 人 CPM / Carboxypeptidase M 人細胞裂解液 (陽性對照) 刺芒柄花素（標準品）Formononetin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,分析標準品

人肝星形細胞RNAHHSteC miRNA5 μg刺芒柄花素Formononetin質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

TCN2 Others Mouse 小鼠 TCN2 / anscobalamin-II 人細胞裂解液 (陽性對照) 大豆素,黃豆苷元(標準品）Daidzein質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,分析標準品
細胞名稱 種屬1克AR，99.5%

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細胞裂解液 (陽性對照) [2-(基炳1酰氧)基]二基-(3-磺炳基)輕氧化銨 3-[Dimqthyl-[2-(2-mqthylprop-2-qnoyloxy)qthyl]czcniumyl]propcnq-1-sulfonctq 3637/6/1

人骨骼肌成肌細胞總RNAHSkMM NAL-Histidine(S)-2-基-3-(4-咪唑基)酸10克BR，99%

HSPA1A Others Human 人 HSP70 / HSPA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Bariumchromate902鋇黃100克BR，98%

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A¤;;Wood alcohol
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。