技術(shù)服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：人病毒18PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
TWSG1 Others Mouse 小鼠 TWSG1 人細胞裂解液 (陽性對照) MEGA-10MEGA-10超級5G85261-20-7COLD

大鼠腦膜細胞完全培養(yǎng)基 100mL2-安基-4-羧醋 2-cminoisonicotinic ccid 1336-8-

MCF 10A人正常上皮細胞 MCF 10A of normal human mammary epithelial cells MEGM Bullet Kit(Clonetics Corparation CC-3150)+100ng/ml choleratoxin(Sigma C8052)2XYTMEDIUMBROTH2XYT 培養(yǎng)基肉湯生物技術(shù)級100GRT

IFNA4 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 標簽)芐青霉素鈉1公斤

MPC-11(小鼠漿細胞瘤) 5×106cells/瓶×2 BALB/3T3(BALB/C小鼠胚成纖維細胞)2183-17-71-1酸鈉鹽ALPHA-NAPHTHYL PHOSPHATE DIwo7ium SALT
SW579(人甲狀腺鱗癌細胞 ) 5×106cells/瓶×2辛弗林Synephrine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

HSaVEC-c 人隱內(nèi)皮細胞(HSaVEC) 500,000cells 成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)辛弗林鹽酸鹽Synephrine HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

腎小管上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)三尖杉寧堿(標準品）Cephalomannine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

GHR Others Rat 大鼠 GHR / Growth Hormone Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 吉莫斯特;吉美嘧啶(標準品)Gimeracil質(zhì)量規(guī)格：>99%,標準品

NRL1 化大家鼠肺成纖維樣細胞吉莫斯特;吉美嘧啶Gimeracil質(zhì)量規(guī)格：>98%,二氫嘧啶脫氫酶(DPD)抑制劑
人病毒18PCR檢測試劑盒直銷CXCL16 Protein Canine 重組狗 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (Fc 標簽)2,7-二溴-9,9-二己基芴(>98.0%(HPLC))2,7-Dibromo-9,9-dihexylfluorene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

MGC80-3(人細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FGFR2 / CD332 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,7-二溴-9,9-二正辛基芴(>98.0%(HPLC))2,7-Dibromo-9,9-di-n-octylfluorene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

黃牛皮膚細胞;BTA-S24,5-亞乙基二硫代-1,3-二硫醇-2-硫酮(>98.0%(GC))4,5-Ethylenedithio-1,3-dithiole-2-thione質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

IL18R1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18R1 人細胞裂解液 (陽性對照) 4,5-乙撐二硫代-1,3-二硫酚-2-酮(>98.0%(GC))4,5-Ethylenedithio-1,3-dithiol-2-one質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

腎小球內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)4,5-甲二硫基-1,3-二硫醇-2-酮(>95.0%(HPLC))4,5-Methylenedithio-1,3-dithiol-2-one質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)
HCT-8(人盲腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0402NCI-H520(人肺鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴腎細胞;MMK3錄化1公斤

人導管瘤細胞;BT-474姆沙伯W/AW-DMCS CHROMOSORB W/cW-DMCS

PDPN Others Mouse 小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鄰苯 o-Phenylenediamine (≥98%, OPD)  10G 通用試劑

CM-R022大鼠甲狀腺上皮細胞完全培養(yǎng)基100mL錄化三本四氮唑沙保羅培養(yǎng)基25毫升2～8℃

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞細胞 牛腎細胞,MDBK細胞 Hs 578Bst(人成纖維細胞)(D-基半乳糖)