PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：人病毒33PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

MET Others Human 人 c-MET / HGFR (aa 956-1390) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) EDTA四鈉鹽，英文名或英文縮寫：EDTA tetrawo7ium salt，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：10克

CL-0364HuT 78(人T細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2四甘醇 Bis[2-(2-xy7noxyqthoxy)qthyl] qtqr 11-60-7

HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系 人絨癌細(xì)胞VP16耐藥株TNFa轉(zhuǎn)染，JEG-3/VP16-TNFa細(xì)胞 7F2(小鼠雜交瘤細(xì)胞)本亞磺酸鈉，英文名或英文縮寫：Benzenesulfinic acid wo7ium salt，級(jí)別：高，99%，規(guī)格：500ul*100支

人細(xì)胞;A-427 [A427]二乙酰基，英文名或英文縮寫：2,4-Pentanedione，級(jí)別：BR，規(guī)格：2克

CD7 Others Mouse 小鼠 CD7 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) PEG400 200g Sigma分裝
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1全氟辛酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析)Pentadecafluorooctanoic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析

IFNA5 Others Human 人 IFNαG / IFNaG / Ierferon alpha-G 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 正辛酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC))n-Octanoic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC)

豚鼠皮膚細(xì)胞;GP-S2蓖麻油酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)Ricinoleic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%

IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 硬脂酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))Stearic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)

CL-0093HCC1937(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2甜蜜素(標(biāo)準(zhǔn)品) Cyclamate質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
人病毒33PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書5-8F, 人高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系(6S)-四氫-L-二硫酸生物蝶呤(6S)-Tetrahydro-L-biopterin Disulfate質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3/VP16-IL-2 大鼠腸內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(6S)-四氫-L-硫酸生物蝶呤(6R)-Tetrahydro-L-biopterin Sulfate質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml7,4'-二羥基黃酮（標(biāo)準(zhǔn)品）7,4'-DIHYDROXYFLAVONE質(zhì)量規(guī)格：供含量測(cè)定用

PILRA Others Human 人 PILR-alpha / PILRA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 千金子素L1（標(biāo)準(zhǔn)品）Euphorbiasteroid質(zhì)量規(guī)格：供含量測(cè)定用

小鼠;P19異型南五味子丁素（標(biāo)準(zhǔn)品）heteroclitin D質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
人細(xì)胞;PC-3 [PC3]wo7iumD-pantothenate右旋泛酸鈉100克CP，97.5%

PDE1C Others Human 人 PDE1C 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 二硫化鉬 Molybdenum disulfide,99% 1317-33-5 100G 通用試劑

人海馬神經(jīng)元G,D,X-401 GDX-401

RLFs, 大鼠 R1000細(xì)胞 WISH(羊膜細(xì)胞)D-白酸，英文名或英文縮寫：D-Leucine，級(jí)別：BR，99%，規(guī)格：5克

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LoVo16872-11-0四扶硼酸Fluoroboric acid
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。