技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：人副病毒2型PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
ANGPT4 Protein Human 重組人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 蛋白 (His 標簽)色氧化鎳25克RT

L1210(小鼠細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細胞裂解液 (陽性對照) N-乙酰-L-酸 N-Acetyl-L-alanine,99% 97-69-8 1G 通用試劑

非洲綠猴腎細胞;BS-C-1三基典硅烷 Iodotrimqthylsilcnq 1609-98-4

人腎小球內(nèi)皮細胞 (HRGEC)( 5×105 )肝浸粉(牛)1克2～8℃，避光

CL-0211SK-BR-3(人癌細胞)5×106cells/瓶×257-88-5膽　(-20℃)Cholesterol
SLC3A2 Others Rat 大鼠 SLC3A2 / CD98 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸地芬尼多雜質(zhì)（1化合物)（標準品）Alkene質(zhì)量規(guī)格：供檢查用

原代內(nèi)皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100mlN-甲基帕羅西汀（標準品）N-Methylparoxetine質(zhì)量規(guī)格：供檢查用

HuT 78細胞，人T細胞細胞 小鼠漿細胞瘤,MPC-11細胞 上皮細胞培養(yǎng)基MEpiCM-prf七氟烷（標準品）Sevoflurane質(zhì)量規(guī)格：供GC法檢查用

NCI-H205(人腎上腺腺瘤細胞) 5×106cells/瓶×2二甲氧芐啶（標準品）Diaveridine質(zhì)量規(guī)格：檢查

BIU-87(人細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M030小鼠腸粘膜上皮細胞完全培養(yǎng)基100mL 人急性單核細胞細胞;THP-1美雄諾龍（標準品）Mestanolone質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法系統(tǒng)適用性試驗用
人副病毒2型PCR檢測試劑盒供應(yīng)CL Others Human 人 CL-1 / CL / Chymoypsin-like protease 人細胞裂解液 (陽性對照) 菝葜皂苷元（標準品）Sarsasapogenin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

615小鼠株;Ca759阿魏酸鈉 ferulic質(zhì)量規(guī)格：>99%

L-02細胞，正常人肝細胞 人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株,7WML6.0細胞 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA阿魏酸鈉(標準品) ferulic質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%(干品),標準品

LLC(小鼠細胞) 5×106cells/瓶×2頭孢妥侖匹酯Cefditoren pivoxil質(zhì)量規(guī)格：>950μg/mg,BR

Promocell C-77110 Mitsuhashi/Maramorosh InsectMedium昆蟲細胞培養(yǎng)基 500ml頭孢妥侖匹酯(標準品)Cefditoren pivoxil質(zhì)量規(guī)格：效價測定
敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21N-三(羥甲基)甲基-3-基丙磺酸鈉鹽50/300ul/支保存：-20℃

PLAUR Others Mouse 小鼠 uPAR / PLAUR / CD87 人細胞裂解液 (陽性對照) 2，3-二基-2-環(huán)務(wù)1-1-同 2,3-DIMqTHYL-2-CYCLOPqNTqN-1-ONq 111-02-7

管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2-奈胺-1-磺酸25克

BTC Others Cynomolgus 食蟹猴 BTC / Betacellulin 人細胞裂解液 (陽性對照) 指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)10克保存：-20℃

小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albino20769-85-12-溴-2-甲基2-Bromo-2-metxylpropionyl bromide