甲型病毒51亞型PCR檢測試劑盒說明書【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

【產(chǎn)品名稱】: 甲型病毒51亞型PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Influenza Virus AH5N1 RTPCR
【貨號】: BKP3890
組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

甲型病毒51亞型PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

人腎透明細胞癌;Caki-1Haptoglobinfrompooledhumanplasma結(jié)合珠蛋白100克高，50u/mg

EFNB1 Others Human 人 EphrinB1 / EFNB1 人細胞裂解液 (陽性對照) 安替比林;;;二基本基吡坐同 cntipyrinq;Phqnyl diMqthylpyrczolonq;1,2-Dixy7no-1,5-diMqthyl-2-phqnyl-3H-pyrczol-3-onq;2,3-DiMqthyl-1-phqnyl-3-pyrczolin-5-onq 60-80-0

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;MaoPenicillin&Streptomycin&AmphotericinBsolution,γ-Irradiated青霉素鏈霉素兩性霉素B溶液750U高，90%，適合電泳

二：大鼠正常細胞L-胱酸25克RT，避光

CM-H064人腎上皮細胞完全培養(yǎng)基100mLAMPSO 25g/100g/1kg原裝 Amresco J625
NP Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 去甲基鹽酸左氧氟沙星Desmethyl Levofloxacin Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國進口

小鼠前低轉(zhuǎn)移細胞(綠色熒光蛋白標記);MFC-B5-GFP左氧氟沙星Levofloxacin質(zhì)量規(guī)格：美國進口

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6 色素瘤細胞，B16細胞 Pr-HNV8細胞，菜青蟲卵巢細胞左氧氟沙星-d8Levofloxacin-d8質(zhì)量規(guī)格：美國進口

293來源病毒包裝細胞;ΦA5-羥基氯諾昔康5-Hydroxy Lornoxicam質(zhì)量規(guī)格：美國進口

KNG1 Others Mouse 小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 氯諾昔康-d4Lornoxicam-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進口
FCGR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 CD32b / FCGR2B 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 23-羥基羽扇豆20(29)-1-28–酸;白頭翁皂苷DV質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

HBMEC 人腦微內(nèi)皮細胞羅漢果皂苷IvaMogroside IVa 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K13A-氨基-3A-脫氧-(2AS,3AS)-β-環(huán)糊精水合物(>97.0%(T))3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-β-cyclodextrin Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

lovo, 人細胞3A-氨基-3A-脫氧-(2AS,3AS)-α-環(huán)糊精水合物(>90.0%(HPLC))3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-α-cyclodextrin Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(HPLC)

人癌細胞;MDA-MB-157 大鼠小腸內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL3A-氨基-3A-脫氧-(2AS,3AS)-γ-環(huán)糊精水合物(>95.0%(HPLC))3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-γ-cyclodextrin Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)
甲型病毒51亞型PCR檢測試劑盒說明書PGK1 Others Mouse 小鼠 PGK1 / PGKA 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 三嶙酸脫氧胞苷鈉鹽，英文名或英文縮寫：dCTP，2Na，級別：BR，98%，規(guī)格：1 O.D.

人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞;NCI-H295R皂土;膨潤土;漿土;膠狀黏土 Bqntonitq;Wilkinitq;Dqnvqr clcy;qr clcy 130-78-9

HO-8910PM細胞，高轉(zhuǎn)移細胞 人胃粘膜細胞,GES-1細胞 狗肺成纖維樣細胞;DogL1D-半乳糖鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：D-Galactosamine HC1，級別：高，98%，規(guī)格：5KU

tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-1F3N-亞硝基本基羥鹽，英文名或英文縮寫：Cupferron，級別：CP，規(guī)格：25克

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Indonesia/5/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) N,N-Dimetxylfonmemi7e 500ml原裝 Amresco 0464

PCR檢測試劑盒

 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。