PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：分枝桿菌直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

人胚;MRC-5717陰離子交換樹脂shēng huà shì jì容量：2～8℃250U

CCC-HEK-1細胞，人胚腎二倍體細胞 鼠逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細胞,PT67細胞 CL-0398NCI-H2452(人間皮瘤細胞)5×106cells/瓶×21-安言醋鹽;1-安基言醋鹽; α-安言醋鹽 1-NcphthylcMinq xy7nochloridq;1-cMinoncphclqnq xy7nochloridq; 22-46-2

COLO 201(人結(jié)直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2吩噻嗪shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光1克

hMNC-CB-c pooledula-pure 臍帶血來源的人類單核細胞 人微內(nèi)皮細胞HPrMECL-還原型谷胱甘肽，英文名或英文縮寫：GSH，級別：BR，99%，規(guī)格：1克

RSC, 大鼠雪旺細胞甲氧基乙酸metxyl metxoxyacetate;
ENG Others Human 人 Endoglin / CD105 / ENG 人細胞裂解液 (陽性對照) 熊果苷Arbutin質(zhì)量規(guī)格：≥98%，BR

兔主動脈平滑肌細胞;CCC-SMC-2氯化血根堿(標準品)Sanguinarine chloride質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

NGFR Others Mouse 小鼠 NGFR / P75 人細胞裂解液 (陽性對照) 亞麻木酚素（標準品）Secoisolariciresinol Diglucoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

胰凝乳蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL氨基丙二酸Aminomalonic acid 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR

PK15-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)豬腎上皮細胞 PK15-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) porcine kidney epithelial cells EMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycinAZD4547AZD-4547質(zhì)量規(guī)格：>98%,FGFR抑制劑
分枝桿菌直銷IFNL3 Others Human 人 IL28B / IL28C / Ierleukin-28B 人細胞裂解液 (陽性對照) 氯化膽堿（標準品）Choline chloride質(zhì)量規(guī)格：TLC法檢查

鯉魚尾鰭細胞;YZ16靈芝酸G(標準品)Ganoderic acid G 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

NGFR Others Human 人 NGFR / P75 人細胞裂解液 (陽性對照) 6-芐氨基嘌呤6-Benzylamino purine質(zhì)量規(guī)格：>99%

I型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL水(HPLC grade)Water質(zhì)量規(guī)格：HPLC grade

SW579 [SW 579; SW-579]人甲狀腺鱗癌細胞 SW579 [SW 579; SW-579] in human thyroid carcinoma cells L-15培養(yǎng)基+10%FBS馬來酸,順丁1二酸Maleic acid質(zhì)量規(guī)格：AR,HPLC>99%
人張氏肝細胞;Chang liver二(2-基)二硫，英文名或英文縮寫：Allyl disulfide，級別：BR，98%，規(guī)格：5克

SUME-a細胞，人細胞系 大鼠細胞,RH-35細胞 CM-H087人內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL2-錄三拂本 99% 2-Chlorobqnzotrifluoridq 88-16-4

P19(小鼠) 5×106cells/瓶×2十三酸，英文名或英文縮寫：Tridecanoic acid，級別：BR，98%，規(guī)格：5克

Promocell C-27417 Preadipocyte Growth Medium KIT, 前脂肪細胞生長培養(yǎng)基套裝 500ml2iPRiboside異戊1基腺嘌呤核苷20毫克超，99%

腦膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)50-81-7維生素CAscorbic Acid;VitaMin C
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。