PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：龜分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

大鼠細胞;CBRH-7919 [CBRH7919]四乙基錄化shēng huà shì jì容量：5克

PGC Others Rat 大鼠 Pepsinogen C / PGC 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,6-二基 2,6-DiMqthylncphclqnq 281-4-0

B16瘤 色素瘤3-羥基本酸，英文名或英文縮寫：3-xy7noxybenzoic acid，級別：CP，99%，規(guī)格：50毫克

A549-EGFP-puro(慢病毒構建穩(wěn)定株)人細胞 A549-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in human lung cancer cells F-12K+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin對硝基本基-β-D-半乳糖苷shēng huà shì jì容量：RT25克

GDNF Protein Rat 重組大鼠 GDNF 蛋白 (His 標簽)7440-69-9鉍BisMuth
ECV-304細胞，人臍內(nèi)皮細胞 銅綠假單胞桿菌(綠膿桿菌) 人真皮成纖維細胞-總RNAHDF-a NA小白菊內(nèi)酯Parthenolide質(zhì)量規(guī)格：0.8%內(nèi)酯含量,BR

R 1610(倉鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2小白菊內(nèi)酯Parthenolide質(zhì)量規(guī)格：>98%標準品

ES-2(人卵巢透明細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0263BGC-803(人細胞)5×106cells/瓶×2 貓腎細胞;F81利扎曲坦Rizatriptan質(zhì)量規(guī)格：>98%

小鼠腎足細胞;Mouse podocyte地瑞那韋乙醇鹽Darunavir Ethanolate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人小腦星形膠質(zhì)細胞( Hac) (1×106 )維拉佐酮Vilazodone質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR
龜分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書SW480 [SW-480]人腺癌細胞 SW480 [SW-480] human colon adenocarcinoma cells 1640+10% FBSβ-D-葡糖糖-6-1酸鈉鹽D-Glucose 6-phosphate  salt 質(zhì)量規(guī)格：98%，美國進口

CD40LG Protein Rat 重組大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(美侖)Coenzyme II reduced tetra salt(NADPH)質(zhì)量規(guī)格：>97%,國產(chǎn)美侖

人羊膜上皮細胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原細胞 Mouse葡萄糖氧化酶Glucose oxidase質(zhì)量規(guī)格：BR,>200U/mg

人癌細胞;MCF7溶菌酶(蛋清)Lysozyme,from egg white質(zhì)量規(guī)格：2萬U/mg,分子生物學級

人臍內(nèi)皮細胞(HVVEC)( 5×105 )HRP;辣根過氧化物酶Peroxidase, Horseradish(HRP)質(zhì)量規(guī)格：BR,RZ>2.5,活性>250U/mg
SCARB1 Others Human 人 SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 朊病毒肽（106-126），人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRPrion Peptide (106-126),Human

神經(jīng)膠質(zhì)細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)前腎上腺髓質(zhì)素（1-20），人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRProadrenomedullin (1-20)(human)

VIP Others Human 人 Vasoactive iestinal peptide / VIP 人細胞裂解液 (陽性對照) 前腎上腺髓質(zhì)素（45-92），人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRProadrenomedullin (45-92)(human)

小鼠Lewis瘤株;LLT蛋白激酶C（19-31）質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRProtein Kinase C (19-31)

CCC-HPF-1細胞，人胚 小鼠腎系膜細胞,MC53細胞 CL-0098HCT-8(人盲腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×2PLX4720質(zhì)量規(guī)格：>98%，B-RafV600E抑制劑PLX-4720
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。