技術服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：小鼠乳腺瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
彈性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL氫氧化500克RT

BxPc-3-EGFP-puro (慢病毒構建穩(wěn)定株)人原位胰腺腺癌細胞 BxPc-3-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in situ pancreatic adenocarcinoma cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycinDL-組酸 DL-Histidine,≥99% 4998-57-6 1G 通用試劑

IL2 Protein Human 重組人 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白異丁酰錄;錄化異丁酰 Isobutyryl chloridq;Isobutyroyl chloridq

人食道上皮細胞(HEEC)(5×105 ) RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 Rattus電解錳100克

大額牛皮膚細胞;BFR-S3818-61-1酸羥乙酯2-xy7noxyetxyl acrylate
ERBB3 Others Human 人 ErbB3 / HER3 人細胞裂解液 (陽性對照) 酮色林,凱他色林(標準品)Ketanserin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

小鼠胚胎成纖維細胞;MEF章胺鹽酸鹽；正辛弗林DL-Octopamine HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%

MSLN Others Human 人 MSLN / Mesothelin (aa 296-580) 人細胞裂解液 (陽性對照) 舒林酸Sulindac質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人小腸平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL舒林酸(標準品)Sulindac質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品

HFTF細胞，人胚胎眼Tenon's囊成纖維細胞 遲緩真桿菌/遲緩埃格特菌 小耳豬肺細胞;SEP-L2托品酸(標準品)Tropic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%
小鼠乳腺瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書LTEP-a-2(人) 5×106cells/瓶×2 人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽L-Valine methyl ester hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

犬腎細胞系/IgR;MDCK/IgRL-賴氨酸L-Lysine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CCL1 Others Mouse 小鼠 I-309 / CCL1 / TCA-3 人細胞裂解液 (陽性對照) L-賴氨酸L-Lysine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

5637 人細胞L-色氨酸L-Tryptophan質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

Hep 3B2.1-7人細胞 Hep 3B2.1-7 human hepatocarcinoma cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBSL-色氨酸(標準品)L-Tryptophan質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品
MDK Protein Human 重組人 Midkine / MDK 蛋白T4DNA聚合酶5克

人胚胎心肌組織來源細胞;CCC-HEH-2 人小氣道上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL丁香油;丁子香油 Clovq oil 8000-34-8

人細胞;5637(HTB-9)安區(qū)南 cztrqoncM 78110-38-0

F3 Others Rat 大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人細胞裂解液 (陽性對照) 錄化1公斤

骨髓間質(zhì)干細胞 Adult bone marrow mesenchymal stem cellsChlorampxenicol 5g/25g原裝/100g原裝 INALCO1758-9321