PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：雞敗血支原體PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

C2C12(小鼠成肌細胞) 5×106cells/瓶×2氮藍四唑，英文名或英文縮寫：NBT，級別：CP，98%，規(guī)格：20微克

CN1 Others Human 人 CN1 / Coactin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (3S)-(-)-1-(叔丁氧羰基)-3-安基 (S)-(-)-1-tqrt-Butoxyccrbonyl-3-cminopyrrolidinq 147081-44-2

大鼠雪旺細胞RSCL-叔亮安醋 L-tqrt-Lqucinq 0829-0-3

TSPAN8 Others Human 人 TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人細胞裂解液 (陽性對照) 聚硅氧烷，英文名或英文縮寫：Silicone，級別：基準試劑，99%，規(guī)格：250毫升

獼猴皮膚細胞;MMS77226-23-5N,N-二甲基基脲1,3-Dimetxyl-3,4,5,6-tetraxy7no-2(1H)-pyrimidinone
CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 咽側(cè)體抑制素ⅣAllatostatin IV質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

骨骼肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)糊精肽，人Amylin,human質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人間充質(zhì)干細胞-肝 人肌肉成纖維細胞瘤，C2C12細胞 B16(色素瘤細胞)緊張素AAngiotensin A質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人小細胞細胞;NCI-H446緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑Angiotensin ConvertingEnzyme Inhibitor質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

CD48 Others Mouse 小鼠 CD48 / BCM1 / SLAMF2 人細胞裂解液 (陽性對照) 緊張素原（1-14），大鼠Angiotensinogen (1-14) ,Rat質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
雞敗血支原體PCR檢測試劑盒說明書TGFBR3 Others Mouse 小鼠 TGFBR3 / Betaglycan 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,3-雙(六氟-α-羥基異丙基)苯(>98.0%(GC))1,3-Bis(hexafluoro-α-hydroxyisopropyl)benzene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

NCI-H446 人小細胞細胞β-NADH;還原性輔酶I二鈉鹽β-NADH.hydrate質(zhì)量規(guī)格：>90%,羅氏分包

hDPSCs, 人前牙髓干細胞蘇拉明鈉Suramin 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人臍動脈平滑肌細胞彈性蛋白酶Elastase, pancreatic from porcine pancreas質(zhì)量規(guī)格：30 units/mg

人正常上皮細胞;MCF 10A 人胰腺星狀細胞完全培養(yǎng)基 100mL脂肪酶Lipase質(zhì)量規(guī)格：20000U/g,BR
CD200 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200 人細胞裂解液 (陽性對照) TEMED四甲基乙二安蛋白組學級透明液體RTsigma

615小鼠滑膜瘤株;ZM7553-安基本硼醋言醋鹽 3-cMINOPHqNYLBORONIC cCID xy7noCHLORIDq 82006-3-1

LTEP-s細胞，人肺鱗癌細胞 小鼠皮膚細胞,JB6-C30細胞 CL-0114Hs 578T(人癌細胞)5×106cells/瓶×2DNASEI脫氧核糖核酸酶 (DNase I)超級白色至米白色結(jié)晶粉末FROZENsigma

Tca-8113(人舌鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2AGAROSERA常規(guī)分析用瓊脂糖生物技術(shù)級白色精細粉末RTsigma

HBdMEC-c 人膀胱微內(nèi)皮細胞(HBdMEC) 500,000cells 皮下脂肪細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)12069-32-8碳化硼Boron carbide;Tetraboron carbide
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。