技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：麻風(fēng)分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
肺大平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)聚乙二醇6000500克

Molt-4細(xì)胞，人T細(xì)胞(CD8+) 小鼠胰腺腺泡細(xì)胞癌細(xì)胞,MPC-83細(xì)胞 人尿道上皮細(xì)胞cDNAHUC cDNA2,2-聯(lián)≥99% 2,2'-Dipyridyl 366-18-7

PA-1(人卵巢腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸胍1克

CRFK(貓腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0190RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞;PC-12 [PC12]布氏肉湯25毫升

大鼠細(xì)胞;MMQ68399-77-93-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸 (MOPSO)MOPSO
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0922 人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL特比萘芬-d7鹽酸鹽Terbinafine-d7 Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1羥基特比萘芬Hydroxy Terbinafine質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

C10ORF54 Others Human 人 B7-H5 / Gi24 / VISTA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 羥基特比萘芬β-D-葡萄糖苷酸Hydroxy Terbinafine β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

U-87 MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U-87 MG of brain asocytic blastoma DMEM+10% FBS胸腺五肽Thymopentin質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

SF767細(xì)胞，人細(xì)胞 陰溝腸桿菌 人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHAEC NA替米考星1酸鹽Tilmicosin phosphate salt質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
麻風(fēng)分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書ICAM2 Others Mouse 小鼠 ICAM2 / CD102 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) N-亞硝基-N-甲基尿烷(>95.0%(GC))N-Methyl-N-nitrosourethane質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

人T瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;Jurkat D,EMUG;4-甲基傘型酮-beta-D-葡糖苷酸4-MUG質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

NOTCH1 Others Mouse 小鼠 Notch-1 / NOTCH1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 米諾地爾Minoxidil質(zhì)量規(guī)格：>98%

CM-R030大鼠腸粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL米諾地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)Minoxidil質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

MCF-7 [MCF7], 人癌細(xì)胞系 牛胚氣管細(xì)胞,EB細(xì)胞 Hs 578T(人成纖維細(xì)胞)米諾地爾（硫酸鹽）敏樂(lè)啶Minoxidil Sulfate質(zhì)量規(guī)格：>99.0%
CD80 Others Human 人 B7-1 / CD80 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DHA脫氫醋酸10克BR

人口腔角質(zhì)細(xì)胞裂解物HOKL鹽酸環(huán)胞苷 Ancitabine hydrochloride 10212-25-6 1G 通用試劑

IGFBP6 Others Human 人 IGFBP6 / IBP-6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 六拂鱗醋 Hqxcfluorophosphoric ccid;

BRL-3A 大鼠正常肝細(xì)胞dTTP(2'-DEOXYTHYMIDINE-5'-TRIPHOSPHATE)TRIwo7iumSALTDIHYDRATE dTTP, Na3, 2H2O超級(jí)白色干燥結(jié)晶粉末FROZENsigma

CL-0118HT-29(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×299-76-3尼泊金metxylparaben