PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：瑪爾摩分枝桿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

DDR1 Others Human 人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) DL-Malicacid蘋果酸1毫克CP，99%

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2固綠 FCF brillicnt bluq G 323-42-9

IL4 Others Mouse 小鼠 IL4 / Ierleukin-4 (Q136D,Y139D) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羅丹明 B Rhodamine B (Dye content, ≥95%) 81-88-9 25G 染色劑

心肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)Cyclooctane環(huán)辛酮25克BR，97%

獼猴肌肉細(xì)胞;MMm7 人細(xì)胞，HT-29細(xì)胞 Bcap-37(癌細(xì)胞)(蛋酸))
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0920鹽酸洛美沙星Lomefloxacin HCl質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

293FT細(xì)胞，表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞 大鼠肝細(xì)胞瘤,H4-II-E-C3細(xì)胞 CL-0324BT-20(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鹽酸洛美沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Lomefloxacin HCl質(zhì)量規(guī)格：含量測定

BC-009(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2氯替潑諾Loteprednol Etabonate質(zhì)量規(guī)格：>99.0%

HTEpC-c 人類氣管上皮細(xì)胞(HTEpC) 500,000cells 人平滑肌細(xì)胞HBVSMC氯替潑諾(標(biāo)準(zhǔn)品)Loteprednol Etabonate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99.0%,標(biāo)準(zhǔn)品

原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml洛伐他汀Lovastatin,Monacolin K質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
瑪爾摩分枝桿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)人胎盤絨毛膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLN-氧基奧氮平Olanzapine N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

MA-891細(xì)胞，小鼠癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 L929(成纖維細(xì)胞) 人葡萄膜色素細(xì)胞;UM氨曲南Aztreonam質(zhì)量規(guī)格：> 95%,BR

CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)氨曲南（標(biāo)準(zhǔn)品）Aztreonam質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品

RH-35(大鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H7N8 (A/mallard/Netherlands/33/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 巴卡丁 IIIBaccatin III質(zhì)量規(guī)格：度> 98%,BR，可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞;AE1201巴卡丁 III（標(biāo)準(zhǔn)品）Baccatin III質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
AGRP Others Mouse 小鼠 AGRP / AgRP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) X-SA瓊脂培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：RT1把/包

MEG-01 人成巨核細(xì)胞細(xì)胞偶氮錄膦mN;2-(4-錄-2-膦醋基本偶氮)-7-(3-肖基本偶氮)-1,8-二羌基-3,6-二磺醋 Chlorophosphonczo MN 77320-04-0

MSTO-211H人細(xì)胞株 Human lung cancer cell line MSTO-211H RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS (50%) Glutaraldehyde solution (Grade I, 50% ...  10ML 通用試劑

MIF Protein Human 重組人 MIF / GLIF 蛋白 (His 標(biāo)簽)L-天門冬酸鉀shēng huà shì jì容量：RT25克

人胚;WI-38 [WI38] 人成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(二硫代蘇糖醇)
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。