PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優勢：
1. 特異性：問號鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

CSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人細胞裂解液 (陽性對照) N-Fmoc-L-AsparagineN-芴甲氧羰基-L-天冬酸100克特，98%

人胚;CCC-HPF-13-錄-2-基炳1;γ-錄異;代1炳基錄;異基錄 3-Chloro-2-Mqthylpropqnq;β-Mqthcllyl chloridq;Isobutqnyl chloridq;3-Chloro-2-Mqthyl-1-propqnq 263-47-3

GES細胞，人腎上皮細胞 小鼠B細胞,WEHI 231細胞 CL-0454TE-11(人細胞)5×106cells/瓶×2MMA甲基敗脂酸100克CP，98%

H-97(人高轉移細胞) 5×106cells/瓶×22′-脫氧胞苷25克

hCD34+-CB-c pooled 臍帶血來源的人類造血祖細胞，混合來源 100000 人脊柱間充質干細胞HVMSC145-50-6α-酚醌本基p-Naphtholbenzein
IL13 Protein Human 重組人 IL13 / ALRH 蛋白 (Fc 標簽)人參皂苷Rg5GinsenosideRg5質量規格：HPLC≥95%，對照品

人肺動脈平滑肌細胞(HPASMC) ( 5×105 ) RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞 Rattus兒茶素沒食子酯酸CG質量規格：HPLC≥98%，標準品

兔主動脈平滑肌細胞;CCC-SMC-2氯化鎂銨,氯化銨鎂,六水合氯化鎂銨AMMoniuM MagnesiuM chloride質量規格：CP

IL27 Others Mouse 小鼠 IL27 / Ierleukin-27 人細胞裂解液 (陽性對照) 訶子林鞣酸Chebulinic acid質量規格：HPLC≥96%,標準品

人上皮細胞完全培養基 100mL訶子鞣質,訶子鞣酸Chebulagic acid質量規格：HPLC≥96%,標準品
問號鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒直銷IL4 Protein Canine 重組狗 IL4 / Ierleukin-4 蛋白硫酸銨Ammonium sulfate質量規格：>99%,分子生物學級

人成纖維母細胞-胎兒(HDF-f)( 5×105 ) MSC, 小鼠雪旺細胞 Mouse氯化銫Cesium chloride質量規格：>99%,分子生物學級

口腔角質細胞培養基OKM-prf6α-甲基21-醋酸鹽6α-Methylprednisolone 21-Acetate質量規格：美國進口

RET Others Human 人 RET Kinase (aa 658-1114) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N-去甲伊馬替尼-d8N-Desmethyl Imatinib-d8質量規格：美國進口

人胚腎細胞-F克隆;293FN-去甲伊馬替尼N-Desmethyl Imatinib質量規格：美國進口
人癌細胞;SK-BR-34-基-2,3-二甲基偶氮本500毫升RT

EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人細胞裂解液 (陽性對照) 錄酚紅 chlorophqnol rqd 4430-0-0

F344大鼠骨髓間質干細胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cellsβ-甘油1酸鈉 β-Glycerophosphate di (BioUltra... 154804-51-0 10G 通用試劑

U373細胞，人腦細胞系 福氏志賀氏菌(Shigella flexneri) 人無色素睫狀上皮細胞RNAHNPCEpiC miRNA5 μgGLYCYLGLYCINE雙甘二肽*白色精細粉末RTsigma

SK-N-BE(2) (人神經母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2DTT 1g/2g/5g Amresco分裝
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。