PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：豬支原體PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

大鼠骨骼肌成肌細胞;L6UREA尿素超級白色粉末RTsigma

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 十五烷酸 Pentadecanoic acid,99% 1002-84-2 10G 通用試劑

T-103AI型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mLHE瓊脂 HqKTOqN qNTqRIC cGcR FOR

TU 686細胞，人細胞 人臍內(nèi)皮細胞,ECV-304細胞 中國倉鼠卵巢細胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-CALCIUMCHLORIDE,ANxy7noUS錄化鈣,無水ACS級白色精細片狀粉末RTsigma

C-33 A(人子細胞) 5×106cells/瓶×21079-66-9二本基錄化膦Chlorodipxenylphosphine
CM-R099大鼠表皮色素細胞完全培養(yǎng)基100mL維生素C棕櫚酸酯/L-抗壞血酸棕櫚酸酯6-O-Palmitoyl-L-ascorbic Acid質(zhì)量規(guī)格：0.99

Saos-2，人成細胞阿斯巴甜Aspartame質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0927 人脂肪細胞完全培養(yǎng)基 100mL克拉維酸鉀Potassium clavulanate質(zhì)量規(guī)格：標準品

小鼠雪旺細胞MSC刺槐素ROBININ質(zhì)量規(guī)格：>98%，標準品

FAS Others Rat 大鼠 FAS / TNFRSF6 / CD95 人細胞裂解液 (陽性對照) Amfebutamone Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98.0%，進口
豬支原體PCR檢測試劑盒供應(yīng)3T3細胞，小鼠成纖維細胞 COLO 205(細胞) 人腎透明細胞癌;Caki-1(1S,4S)-N-去甲基鹽酸舍曲林(1S,4S)-N-Desmethyl Sertraline Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CSF2 Protein Mouse 重組小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標簽)N-去甲基利福平N-Demethyl Rifampin質(zhì)量規(guī)格：美國進口

T-47D(人管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 去甲基波生坦Desmethyl Bosentan質(zhì)量規(guī)格：美國進口

人表皮色素細胞-淺色素HEM-l羥基去甲基波生坦Hydroxy Desmethyl Bosentan質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CD22 Others Human 人 Siglec-2 / CD22 人細胞裂解液 (陽性對照) 波生坦Bosentan質(zhì)量規(guī)格：美國進口
人正常上皮細胞;MCF 10AAmresco 進分瓊脂粉質(zhì)量規(guī)格：BR,進分Agar

人肺動脈平滑肌細胞(HPASMC) ( 5×105 )氟伏沙明質(zhì)量規(guī)格：>98%,油狀Fluvoxamine

CL-0325C3H/10T1/2, Clone 8(小鼠胚胎成纖維細胞)5×106cells/瓶×2醋酸鋅（二水）質(zhì)量規(guī)格：AR,>98%Zinc acetate

人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細胞;M619 大鼠胎兒真皮成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL舒巴坦鈉質(zhì)量規(guī)格：BR,>99%Sulbactam

H-4-II-E 大鼠肝細胞瘤細胞9-溴芴(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)9-Bromofluorene
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。