【產(chǎn)品名稱】: 諾卡菌PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Nocardia brasiliensisPCR
【貨號】: BKP4090

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

諾卡菌PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。

非洲綠猴腎細胞(SV40轉(zhuǎn)化);COS-1 [COS1]鹽酸鳥糞素，英文名或英文縮寫：Guanine HC1，級別：BR，935ug/mg，規(guī)格：100KU

GZMH Others Human 人 Granzyme H 人細胞裂解液 (陽性對照) 言醋西替利嗪 Cqtirizinq xy7nochloridq 83881-2-1

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化);PC-12(高分化)RNASEA,PANCREATIC核糖核酸酶A*白色至淺棕色粉末FROZENsigma

人腦微內(nèi)皮細胞 (HBMEC) ( 5×105 )STREPTAVIDIN鏈霉親合素生物技術級5MG9013-20-1Frozen

肺平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)4-metxylumbelliferone 5g/10g/25g/100g原裝 Sigma M1381
CCNE1 Others Mouse 小鼠 CCNE1 / Cyclin-E1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 桃葉珊瑚苷Aucubin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

神經(jīng)小膠質(zhì)細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)甲硝唑Metronidazole質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

鯉魚尾鰭細胞;YZ16 人皮膚基底細胞癌，TE 354.T細胞 Acc-2(涎腺腺樣囊性癌細胞)甲硝唑(標準品)Metronidazole質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品

人急性單核細胞細胞;THP-1乙酰哈巴苷8-O-Acetylharpagide質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%，標準品

ERBB3 Others Human 人 ErbB3 / HER3 人細胞裂解液 (陽性對照) 黃決明素Chrysoobtusin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
REG3B Others Mouse 小鼠 REG3B / Pap1 人細胞裂解液 (陽性對照) MG132,蛋白酶體抑制劑MG-132質(zhì)量規(guī)格：>98%，proteasome抑制劑

非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4BPD184352 (CI-1040)PD-184352 (CI-1040)質(zhì)量規(guī)格：>99%,MEK1/2抑制劑

NCI-H520細胞，人肺鱗癌細胞 小鼠間質(zhì)細胞瘤細胞,MLTC-1細胞 CM-R023大鼠管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL2-脫氧-D-葡萄糖2-Deoxy-D-glucose質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

QGY-7701(人細胞) 5×106cells/瓶×2坎地沙坦Candesartan質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)

Promocell C-28040 Pericyte Growth Medium, 周細胞生長培養(yǎng)基 500mlRuxolitinib(INCB018424) phosphateINCB018424) phosphate質(zhì)量規(guī)格：>98%,JAK1/2抑制劑
諾卡菌PCR檢測試劑盒說明書NCI-H209(人小細胞細胞) 5×106cells/瓶×2Hematinchloride血晶素25克IND

BNL CL.2(小鼠胚胎肝細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M046小鼠腸上皮細胞完全培養(yǎng)基100mL 人細胞;RPMI-8226 [RPMI8826]草酸酰胺乙酯 Ethyl oxamate,98% 617-36-7 25G 通用試劑

獼猴皮膚細胞;MMS4熒光速;熒光橙 Fluorqscqin;Dixy7noxyfluorcnq;Tqtrcoxyphthclophqnonqcn hydridq;C.I. 45350 1931-7-2

CD5 Others Rat 大鼠 CD5 人細胞裂解液 (陽性對照) (T-4)-雙(D-葡萄糖酸-κO1,κO2)-鋅，英文名或英文縮寫：Zinc gluconate，級別：BR，98%，規(guī)格：5U

人肺微內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL硅酮　OV-225SILICONE OV-225
PCR檢測試劑盒

諾卡菌PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。