PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：皮諾卡菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

EPHB1 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) shēng huà shì jì容量：250克

CL-0181P3X63Ag8(小鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×2D-正亮酸 D-Norleucine,99% 327-56-0 500MG 通用試劑

HR-8348細(xì)胞，直腸腺癌 人細(xì)胞瘤細(xì)胞,JK(Jurkat)細(xì)胞 人小細(xì)胞;NCI-H22271,3,9-三基皇嘌呤 ≥98% (HPLC) ISOCcFFqINq 219-3-4

Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂shēng huà shì jì容量：500毫升

ERBB2 Others Human 人 ErbB2 / HER2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 酸;敗脂酸metxyl acrylate;2-Propenoic acid metxyl ester
CCL21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白瑞舒伐他汀/羅蘇伐他汀游離酸Rosuvastatin質(zhì)量規(guī)格：>97%,游離酸

P19(小鼠) 5×106cells/瓶×2 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 蘇丹I/溶劑黃14Sudan I/Solvent Yellow 14質(zhì)量規(guī)格：BS生物染色級(jí)

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;MEF蘇丹II/蘇丹2/溶劑橙7Sudan II /Solvent Orange 7質(zhì)量規(guī)格：BS

KDM1A Others Human 人 KDM1 / LSD1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 蘇丹Ⅲ/III/溶劑紅23Sudan3質(zhì)量規(guī)格：BS

HGC-27人細(xì)胞蘇丹Ⅳ/4/溶劑紅24Sudan IV/Solvent Red 24質(zhì)量規(guī)格：BS
皮諾卡菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格血小板衍生生長(zhǎng)因子L-絲氨酸L-Serine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞 (HPAF)( 5×105 ) RLFs, 大鼠 RattusL-抗壞血酸鈉 L-ascorbate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

犬腎細(xì)胞;MDCK/IgR焦1酸鈉(AR) pyrophosphate質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 碳酸氫銨(AR)Ammonium bicarbonate質(zhì)量規(guī)格：AR

人上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL氯化銨(AR)Ammonium chloride質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR
ECE1 Others Human 人 ECE1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 血清兔抗人IgGshēng huà shì jì容量：250克

人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R啊利新藍(lán)8GS cLCIcN BLUq 8GX 1633-92-3

EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3-環(huán)己基炳醋 Cyclohqxcnqpropionic ccid 701-97-3

人直平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL1shēng huà shì jì容量：RT10克

L1210細(xì)胞，小鼠細(xì)胞 多形擬桿菌 大額牛腎細(xì)胞;BFR-K1(1酸肌酸鈉)
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。