【產品名稱】: 馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Madurella spp.PCR
【貨號】: BKP3962

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

非洲綠猴腎細胞;Vero E63,3-Dimetxylallylbromide4-溴-2--2-丁烷25克BR

人腎近端小管上皮細胞(HRPTEpiC)膠原蛋柏 Type II(2-8°C) Collcgqns polypqptidq 9007-34-2

CL-0203SCaBER(人膀胱鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2ProteinprotectantTY蛋白保護劑TY1克生物技術級，200u/mg

人胰腺導管癌細胞;CFPAC-1 大鼠腦微內皮細胞完全培養基 100mL2′-脫氧胞嘧啶核苷鹽酸，英文名或英文縮寫：2′-dCoHC1，級別：BR，98%，規格：HC5000u

P815 小鼠肥大細胞癌細胞54897-59-5DL-2,3-二基酸鹽酸鹽DL-2,3-DIAMINOPROPIONIC ACID MONOxy7noCHLORIDE
HFL-I細胞，人胚 鼠肌原細胞,C2C12細胞 T-105BIII型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)10mL鹽酸氟西?。藴势罚?/span>Fluoxetine Hydrochloride質量規格：HPLC>98%,標準品

SK-N-SH(人神經母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2馬來酸氟伏沙明Fluvoxamine maleate質量規格：>98.5%,BP2007

HUVEC-c Growth Medium 2single donor 500,000cells Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)馬來酸氟伏沙明（標準品）Fluvoxamine maleate質量規格：HPLC>98%,標準品

原代細胞特制基礎無血清培養基Many types of cells包裝：500/100ml福美斯坦Formestane質量規格：>99%

MMP8 Others Mouse 小鼠 MMP8 / CLG1 CHO細胞裂解液 (陽性對照) 福美斯坦(標準品)Formestane質量規格：HPLC≥98.0%,標準品
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B1 胰蛋白酶-EDTA(含10mL 酶解緩沖液) 1mL甘羅溴銨（標準品)Glycopyrrolate質量規格：含量測定

MCF-7(MCF7)(ATCC來源), 人癌細胞 Human安倍生坦Ambrisentan質量規格：>98%

CHST15 Others Human 人 CHST15 / BRAG 人細胞裂解液 (陽性對照) 安倍生坦(標準品)Ambrisentan質量規格：>98%,標準品

人肺鱗癌細胞;NCI-H520鹽酸決奈達隆Dronedarone HCL質量規格：>99%,鹽酸鹽

GPR56 Others Human 人 GPR56 / TM7LN4 人細胞裂解液 (陽性對照) 決奈達隆(標準品)Dronedarone質量規格：HPLC>98%,標準品
馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒說明書人脊髓星形膠質細胞總RNAHA-sp NA叔丁基對本二酚，英文名或英文縮寫：TBHQ，級別：BR，規格：25克

PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 硼醋銨;硼醋輕銨;偏硼醋銨;四硼醋銨 cMMoniuM borctq;cMMoniuM Mqtc-borctq;cMMoniuM tqtrcborctq 18-87-4

大鼠嗜堿性粒細胞性細胞;RBL-1二丁基流迷 96% Dibutyl sulfidq 244-40-1

BEL-7402細胞，細胞 人口腔表皮樣癌細胞,KB細胞 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2脂嶙壁酸shēng huà shì jì容量：5毫克

C57BL/6小鼠T細胞瘤細胞;RMABrainHeartInfusionAgar 500g原裝 BD 241820
PCR檢測試劑盒

馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。