技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：反芻獸曼氏桿菌PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
SMR3B Others Human 人 SMR3B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 馬尿酸-L-本酸shēng huà shì jì容量：保存：-20℃25毫克

CL-0029B16(小鼠色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2變色素2R Chromotrope 2R 4197-7-3 1G 通用試劑

H4細(xì)胞，人 人大動脈平滑肌細(xì)胞,HASMC細(xì)胞 正常大鼠腎細(xì)胞(EGF受體陽性);NRK49F酪蛋柏胨 IRON PqPTONcTq 91079-40-

BSC-1(猴腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2N-乙酰-D-基葡萄糖shēng huà shì jì容量：RT25克

COMP Others Human 人 COMP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 12501-23-41鎢酸Phosphotungstic acid
Hela, 人細(xì)胞系 Human鹽酸貝那普利/苯那普利Benazepril Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ADIPOQ Others Mouse 小鼠 ADIPOQ / ACDC / Adiponectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸貝那普利/苯那普利(標(biāo)準(zhǔn)品)Benazepril Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：含量測定

鐵硒傳遞蛋白 100xITS苯扎貝特Bezafibrate質(zhì)量規(guī)格：>98%

ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 苯扎貝特（標(biāo)準(zhǔn)品）Bezafibrate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SK-N-SH布南色林Blonanserin質(zhì)量規(guī)格：>99%
反芻獸曼氏桿菌PCR檢測試劑盒直銷FGF6 Protein Human 重組人 FGF6 / FGF-6 蛋白5-甲酰水楊酸5-Formylsalicylic acid質(zhì)量規(guī)格：>97%

B16-F10(小鼠皮膚色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞HM阿脲Alloxan, monohydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分

人肺動脈成纖維細(xì)胞總RNAHPAF NA檸檬酸二銨,檸檬酸氫二銨Ammonium , dibasic質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

CDH8 Others Rat 大鼠 Cadherin-8 / CDH8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乳酸鈣五水(>98%,USP)Calcium (L)-lactate, pentahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS32'-脫氧胸苷-5'-一1酸二鈉鹽dTMP, 2'-Deoxythymidine-5'-monophosphate di salt質(zhì)量規(guī)格：>97%,分子生物學(xué)級
PK15-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)豬腎上皮細(xì)胞 PK15-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) porcine kidney epithelial cells EMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin萊苞迪甙A質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRRebaudioside A

IL13 Protein Human 重組人 IL13 / ALRH 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)萊苞迪甙A（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Rebaudioside A

人肺動脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC) ( 5×105 ) RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞 Rattus環(huán)亮氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%Cycloleucine Methyl Ester.HCl

兔主動脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-2水溶性四氮唑-3質(zhì)量規(guī)格：BRGLT003

IL27 Others Mouse 小鼠 IL27 / Ierleukin-27 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 表兒茶素沒食子酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品(?)-Epicatechin gallate/ECG