技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：野牛奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
猴腎細胞;vero IgRCD4-N6-BenzoyladenineN-(5H-嘌呤-6-基)本甲先胺25克BR，98%

COL9A1 Others Human 人 COL9A1 人細胞裂解液 (陽性對照) 10-酰葉醋 10-ForMylfolic ccid 134-02-4

髓母細胞瘤組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml棕櫚醋酯 Mqthyl PclMitctq 11-39-0

SW13細胞，人腎上腺皮質瘤 人癌細胞,BT-549細胞 溶液AMSL-NorvalineL-2-基戊酸1克BR，99%

SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-734598-49-75-溴-1-茚酮5-Bromoindanone
A431細胞，表皮癌細胞系 人T細胞系,H9細胞 tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-1D3銀杏內酯C(標準品)Ginkgolide C質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

BIU-87(人細胞) 5×106cells/瓶×2銀杏內酯J(標準品)Ginkgolide J質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CST5 Others Human 人 CST5 人細胞裂解液 (陽性對照) 隱丹參酮(標準品)Cryptotanshinone質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4B隱丹參酮Cryptotanshinone質量規(guī)格：HPLC≥97%，BR

HA Others Influenza B 乙型 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) ?；蛆Z去氧膽酸(標準品)Taurochenodeoxycholic acid質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
野牛奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒直銷雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5 小鼠表皮角質形成細胞完全培養(yǎng)基 100mL醋甲唑胺(標準品)Methazolamide質量規(guī)格：HPLC≥99.0%,標準品

BRL 3A, 大鼠肝正常細胞 Rattus齊拉西酮Ziprasidone質量規(guī)格：含量≥99%

IL1RAPL2 Others Human 人 IL1R9 / IL1RAPL2 / IL1 Receptor 9 人細胞裂解液 (陽性對照) 塞曲司特/西拉達司/塞拉司特Seratrodast質量規(guī)格：含量≥98.0%

人角膜細胞裂解物HKL美托拉宗Metolazone質量規(guī)格：>99%,BR

CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 美托拉宗(標準品)Metolazone質量規(guī)格：HPLC≥99.0%,標準品
LTEP-a-2細胞， 人喉表皮樣癌細胞,HEp-2細胞 tTA基因修飾的小鼠細胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4C55-胞苷二嶙酸單鈉鹽shēng huà shì jì容量：100克

雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2F8堿藍6B Alkali blue 6B 1324-80-7 10G 通用試劑

INSR Others Human 人 Insulin Receptor / INSR / CD220 ( Short Isoform ) 人細胞裂解液 (陽性對照) D-2,3-二安基炳醋言醋鹽 H-D-DcP-OH HCL 6018-26-0

人葡萄膜色素細胞;UMpH10.0STANDARDpH標準液10.0生物技術級藍色無混濁溶液RTsigma

人氣管上皮細胞(HTEpiC)(5×105 )67-68-5二甲亞砜 99.7+%Dimetxyl sulfoxide