技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：海藻巴斯德菌=海藻百伯史坦菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
20-Hydroxyecdysone  中文名：20-羥基蛻皮甾酮  分子式：C27H44O7  度：98.0%  兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Stigmasterol glucoside  中文名：  分子式：C35H58O6  度：97.0%  兔抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Stigmastane-3,6-diol  中文名：  分子式：C29H52O2  度：%  兔抗糖蛋白抗體elisa試劑盒   兔抗糖蛋白抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔抗糖蛋白抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗糖蛋白抗體試劑盒、兔抗糖蛋白抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

17α-Thevebioside  中文名：  分子式：C36H56O13  度：%  兔抗平滑肌抗體elisa試劑盒   兔抗平滑肌抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔抗平滑肌抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗平滑肌抗體試劑盒、兔抗平滑肌抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

α-Spinasterol acetate  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2  度：96.0%  兔抗凝血酶elisa試劑盒   兔抗凝血酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔抗凝血酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗凝血酶試劑盒、兔抗凝血酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
Salusin-α   英文名稱：   Salusin-α   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Salusin-α  Parecoxib   中文名：帕瑞考昔鈉  分子式：C19H17N2NaO4S 

S-100蛋白   英文名稱：   S-100protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   S-100  4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene  中文名：4,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪  分子式：C28H18N2O2 

Relax-ISOBloodDNAKitI   50ml（血量）                 Tranexamic acid  1197-18-8  中文名：凝血酸  分子式：C8H15NO2 

Rat von Willebrand factor / ristocetin cofactor (VWF) ELISA Kit 大鼠性因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒  1-Cyclopropyl-6,7-difluoro-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C16H15F2NO4 

Rat vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(VEGFR-2)ELISA試劑盒  (1R,2R)-1-Amino-2-indanol  163061-73-2  中文名：(1R,2R)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO
海藻巴斯德菌=海藻百伯史坦菌PCR檢測試劑盒說明書大鼠周神經(jīng)成纖維細(xì)胞(RPNF)(5×105)麻楓樹酚酮B（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Jatropholone B

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS33β-乙酰氧基-7,25-甘遂二1-24(R)-醇（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol

615小鼠前瘤株;Fc 小鼠腎小管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL11-羥基柳杉酚（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品11-hydroxy-sugiol

MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MouseL-乳酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品L-(+)-Lactic acid

CDH16 Others Human 人 CDH16 / Cadherin-16 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 辛伐他汀二聚體雜質(zhì)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Simvastatin Dimer Impurity
615小鼠株;Ca763 小鼠卵巢成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL1-本基-3-吡唑烷酮50U

MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元 Mouse2,4-二錄酚 2,4-Dichlorophqnol 10-83-

CES2 Others Human 人 CES2 / Carboxylesterase-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) DEAE葡聚糖5克

人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞;WI-38 VA13亞系2RA鉍粒5克

GFRA1 Others Rat 大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 6361-21-32-錄-5-硝基2-Chloro-5-nitno