PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優勢：
1. 特異性：莫佩亞病毒PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

SK-NEP-1(人腎母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2糖化酶10克RT

Hela(人細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0426RKO-E6(人轉基因細胞)5×106cells/瓶×2 人胚;MRC-5雙酚芴 9,9-Bis(4-xy7noxyphqnyl)fluorqnq 336-71-3

TNFa轉染耐VP16絨癌細胞;JEG-3-VP16-TNFaMEGA-9MEGA-9超級5G85261-19-4RT

CD79B Others Mouse 小鼠 CD79B / B29 人細胞裂解液 (陽性對照) 100bpDNALadderⅡ100克

MKN-45 低分化(-N，N-雙(2-乙磺酸))
FCGR1 Others Rat 大鼠 CD64 / FCGR1A 人細胞裂解液 (陽性對照) 司班80;司盤80Span* 80質量規格：BR

NIH?3T3? 小鼠成纖維細胞聚乙二醇1000PEG 1000質量規格：分子量1000

非洲綠猴腎細胞;BS-C-1胰蛋白胨(BD)Tryptone質量規格：BD 211705

Hela, 人細胞系丹磺酰氯DNSCl, Dansyl chloride質量規格：>98%

人小細胞細胞;NCI-H209 大鼠肺大內皮細胞完全培養基 100mLN-乙基順丁1二N-Ethylmaleimide質量規格：>98%,BR
莫佩亞病毒PCR檢測試劑盒直銷IB2 Others Human 人 IB2 / B2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 西洛多辛(標準品)Silodosin質量規格：>98.5%，標準品

小鼠成肌細胞;C2C121酸溴莫尼定Brimonidine tartrate 質量規格：>99%,BR

Lec1細胞，卵巢細胞 人細胞,FL62891細胞 CL-0152MDA-MB-453(人癌細胞)5×106cells/瓶×2Bacto酵母浸粉(BD原裝)Yeast extract質量規格：Bacto;BD212750

中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1無水碳酸鈉 carbonate anhydrous質量規格：AR,≥99.8%

POSTN Others Human 人 OSF2 / POSTN 人細胞裂解液 (陽性對照) D-果糖D-Fructose質量規格：>99%,BR
Calu-6(人肺退行性癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人微內皮細胞HPrMEC鄰磺酰酞鈉鹽，英文名或英文縮寫：Cresol Red wo7ium salt，級別：生物技術級，98%，規格：250毫克

人腦微內皮細胞cDNAHBMEC cDNAS-Alpine-硼完 B-ISOPINOCcMPHqYL-9-BORcBICYCLO[3.3.1]NONcNq 4371-63-1

IL23 Others Human 人 IL-23A & IL-12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) OED60K型發酵工業通用消泡劑，英文名或英文縮寫：Antifoam OED60K，級別：超，98%，規格：1克

B95-8 絨猴EBV轉化的白細胞3,4-乙撐二氧，英文名或英文縮寫：EDOT，級別：2N，99%，規格：10克

CL-0190RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞細胞)5×106cells/瓶×2OPD 5g/10g/50g/250g原裝 Amresco 0688
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。